原文：
Protocol for Obtaining Platelet-Rich Plasma (PRP), Platelet-Poor Plasma (PPP), and Thrombin for Autologous Use
Aesthetic Plastic Surgery, Published online: 31 August 2012
作者：Diogo Franco et al
摘译：xuyang19791129

摘要

背景：血浆在很多方面已经被广泛的研究，如加速组织的愈合，止血。现在的研究正倾向于分离PRP和PPP，更好的利用他们的特性，尤其是在术后或经久不愈的伤口。考虑到离心机以及操作技术的不统一，不同公司的生物胶多样化，因此此文推荐一种获取PRP、PPP和凝血酶的好方法，并用于自体应用。

方法：按照作者的方式进行分离。

结果：血小板浓度6.03×108 /ml，凝血酶浓度33.54 nM。

结论：利用作者的这个方法可以很好的得到PRP、PPP和自身凝血酶，尤其是他们可立即获取，消除了病毒感染和免疫反应。并且这个操作简单易行，费用低廉。

方法

为了提取到理想的PRP及具有高浓度的血小板同时也能提供起到激活作用的自身凝血酶，建立起一个理想的离心时间和离心力是很关键的。40毫升的血被分配到含有抗凝剂枸橼酸钠的试管中，以400×g 离心10分钟，在这个阶段后，三层很容易区分开，血浆在最顶端，红细胞在底部，中间的部分含有大量的血小板和白细胞，用18号针头吸出含有血小板的血浆层，血沉棕黄层抽出放到例外的试管，这次没有任何添加剂：一个试管用来制作血浆（P管），一个试管用来制作凝血酶（T管），仅仅1.5ml的血浆用于制作凝血酶，加入0.5ml的10%葡萄糖酸钙，在37℃的水浴箱15分钟。然后2个试管再次离心，时间10分钟，离心力800×g，在这次离心后，T管包含富含凝血酶的液体，而P管含有沉淀的血小板和一些红细胞，将顶部的三分之二被移除被称作PPP，剩下的部分是沉降的PRP。
 
接下来的步骤就是评估获得自体血浆和凝血酶方法的有效性，通过计算PRP中血小板的数量，分析凝血酶的活性，通过其他的方法对PPP进行间接评估。凝血酶的浓度通过ELISA免疫荧光实验测量。获得的PRP，通过显微镜计算血小板数量。

结果 

9个样品产生10个血小板计数和11个凝血酶样品。其中2个凝血酶样品来自一个全血的样品。

通过PRP计算血小板的数量，结果可以直接分析PPP。在浓缩的血液中容易计算血小板数量，并且可以和早期研究的PRP的含量进行比较。发现平均值均比原来有提高。

在凝血酶的分析中，平均浓度是33.54 nM，凝血酶的体积大约是2毫升，每40毫升全血中可以产生12毫升PPP，6毫升PRP。

讨论
　　　
本研究的方法最初也是根据其他的作者，才有的两步离心法，第一步分离红细胞，第二步浓缩血小板，关系到PRP的提取量主要和三个重要的变量有关，离心的力量，离心时间，血浆体积降低，目的就是在最短的时间内获得更高浓度的血小板。我们感到越大的离心力就会有更多的血小板沉淀。
　　　
在一些研究中发现血小板的浓度在第一次离心力为200×g为最高，在以第二次离心力为200×g持续10分钟血小板的浓度较最初要增加205.7%。Efeoglu等第一次离心用300×g第二次用5000×g分别10分钟和5分钟，血小板计数平均增长429.6 %，在这些研究中会有很多相似的发现，在第二次的离心力明显要比第一次的离心力要大。
　　　
1998年MARX提出人体血浆中的生长因子可以广泛应用到康复、止血、黏合等医学领域。当血小板被激活，生长因子依靠着他们的特殊的活性发挥作用，生长因子包括(PDGF)(TGF-b), (PF4), (IL1),(PDAF), (VEGF),(PDEGF), (ECGF),(TSP1)。
　　　
本实验研究的目的不是评估生长因子在PRP里的浓度，而是制备过程中提高血小板的的浓度。不过这项研究和血小板的临床应用仍在继续。
　　　
MARX用牛的凝血酶去激活PRP进行骨移植实验，从那时候起，很多研究者设计提取血浆的步骤，因为血浆里含有血小板成分，而血小板含有大量的生长因子。
　　　
随着自动机械的发明、血浆可以出售。一些公司利用供者血浆以及牛凝血酶生产出PRP、PPP以及各自生产出的血小板凝胶和纤维蛋白凝胶，不过高额的成本成为了最主要的问题。如果用动物的凝血酶去激活血浆可能会引发过敏反应和其他类似于异物反应的情况，所以也要从血浆中提取同类别的凝血酶。虽然可以通过机器从血浆中分离出凝血酶，但是从经济角度，可能要花费更多。由此我们可以看出PRP和PPP自体提取的必要性，我们改进提取方式，降低提取成本。自体血浆在的手术过程中成本（US$ 30.00）相比较工业生产的纤维蛋白胶成本（从US$ 150.00 到US$ 250.00/ml）要少很多。成本包括注射器、针头、收集管、葡萄糖酸钙，离心机、水浴箱等等，即使手术室内有没有设备，PRP、PPP、凝血酶的提取也可以在血液中心、病理室、血库内完成。
　　　
一些研究指出纤维蛋白和PRP/PPP应用可以明显降低术后水肿、减少液体聚集、和需要引流的面部手术。也有报道说能够缩短手术时间增加止血作用，另外有效的加速创口愈合。利用血浆制备成血小板凝胶或是纤维蛋白胶不仅能在整形科应用、并且可以继续研究下去扩充各个学科。而在实际过程中，我们将继续此项目研究，指定提取流程、研究纤维蛋白胶在手术中的应用，试图找到PPP如何做到降低术后血肿。
　　
由于避免了非自身的和动物源性的产品的应用，本文制作PRP、PPP、凝血酶的流程好于其他提取工艺。并且可以一次性的获得3种不同的成分，操作简单可重复性强。PRP等产品的应用只是刚刚开始，不仅应用到整形外科在其他方面如难治性创口也有一定的疗效。而这些自体的产品加速愈合、止血等功效有待进步检测，待制备成粉末进行临床应用。

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