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基础篇细胞培养-细胞的换液与传代

(2011-03-21 15:00:05)
标签:

杂谈

1。细胞换液(贴壁细胞)

1)吸掉旧的培养基

2)PBS洗1-2次(根据细胞状态,可省略)

3) 加入新的培养基(一般25cm2的培养瓶中加3-5ml,10cm的皿里加8-10ml)

 

2。细胞传代(贴壁细胞)

1) 吸掉旧培养液

2)用PBS 洗涤细胞一至二次。

3)加入trypsin-EDTA 溶液(1ml/25cm2, 2ml/75cm2),37 ℃作用数分钟,于倒立显微镜下观察,当细胞将要分离而呈现圆粒状时,吸掉trypsin-EDTA 溶液。(若不移去trypsin-EDTA,则在trypsin-EDTA 作用后,加入适量含血清之新鲜培养基终止trypsin 作用,离心后再吸掉上清液。)

注:离心速度的问题,一般为800-1000rpm离5min,当细胞状态不好的,可用500-600rpm离3min,因为状态不好或者死细胞不太好离下来,留下来的是状态比较好的,而且也低转速减少了对细胞的损伤

4)轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落,加入适量之新鲜培养基,以吸管上下吸放数次以打散细胞团块,混和均匀后,依稀释比例转移至新的培养瓶中,以正常培养条件培养。

 

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