血球计数板的结构和使用

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1.血球计数板的结构
血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用。这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3。
计数室通常有两种规格:一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造,它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。
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2.血球计数板的使用(以计数酵母菌为例)
(1)将血球计数板用清水冲洗干净,晾干,在中央的计数室上加盖专用的盖玻片。
(2)将稀释、摇匀的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液自行缓缓渗入,多余菌液用吸水纸吸去,稍待片刻(约5min),使酵母菌全部沉降到血球计数室内。
(3)如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上、右上、左下、右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数。如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。
(4)当遇到位于方格线上的酵母菌,一般只计数方格的相邻两边及其顶角。
(5)每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数:
酵母细胞总数/ ml =每小格内酵母细胞平均个数×400×稀释倍数/计数室容积(ml)
3.血球计数板的清洁
血球计数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物,若不干净,则必须重复清洗直到干净为止。