善牧溶菌酶简介

       新型抗菌抗病毒免疫增强剂

1922年，英国细菌学家亚历山大•弗莱明发现并命名溶菌酶（lysozyme，LZM）。1963年，Salton等研究证明溶菌酶能够切断N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间β-1，4糖甘键。之后，溶菌酶研究日益成熟并广泛应用在食品、日化、医药、保健、保鲜等领域，体现出药理、保健、防腐三大功能。

一、溶菌酶的主要特点 

1、溶菌酶纯品为白色或者微白色无定形粉末，无臭，味甜，易溶于水，不溶于丙酮、乙醚。常温保存，性状稳定。

2、溶菌酶作用的适宜温度在35℃～50℃，适宜pH5.3～7.4，其水溶液在pH1.2～11.3之间稳定。

3、溶菌酶具有较强热稳定性，在pH4～7时，80℃条件下处理5分钟、100℃条件下处理1分钟酶活仍然保持90%以上。

4、溶菌酶为一种碱性蛋白质，常与氯离子结合成为溶菌酶氯化物，不会因为有机溶剂的处理而失活。不易被胃酸分解。

5、溶菌酶具有良好的生物相容性，是乳酸菌、双歧杆菌等体内有益菌的增殖因子；和动物体内多元生物物质联合作用，增强免疫，抑杀多种病原菌。

6、溶菌酶对于耐药性细菌有确切抑杀效果，与抗生素配伍使用能增效2~8倍，减少抗生素用量，有效控制药残。

7、溶菌酶无毒、无害、无残留、无耐药性，符合绿色、安全、健康、环保要求。

二、溶菌酶的主要功能

1、抗菌消炎

溶菌酶主要通过破坏细胞壁的β-1,4糖苷键，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌死亡，对革兰氏阳性菌（尤其是金黄色葡萄球菌、链球菌、梭菌等）、好气性孢子形成的菌、耐辐射微球菌均具有良好的分解作用，对大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌、结核分枝杆菌和副血性弧菌等致病菌也具有明显溶解作用。溶菌酶可与各种诱发炎症的酸性物质结合，使其失活，并能增强其它药物的疗效。

2、抗病毒

溶菌酶在体内近于中性的pH环境下带有大量的正电荷，可与带负电荷的病毒蛋白直接作用，和DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使侵入体内的病毒失活；溶菌酶能激活宿主的免疫系统，增强肿瘤细胞的免疫原性，从而具有抗肿瘤作用，可以抑制流感病毒和腺病毒生长，阻止疱疹病毒感染。

3、增强免疫力

溶菌酶参与机体多种免疫反应，保持机体生理平衡，加强血清灭菌蛋白(Properdin)、γ-球蛋白(γ-globulin)等体内防御因子对感染的抵抗力，激发机体内吞噬细胞的噬菌作用；能诱导2型(Th2)T辅助细胞反应，减少外来抗原的刺激，提高抗病力和生产性能。

4、调节肠道菌群平衡

溶菌酶能够抑杀肠道内有害微生物，促进有益微生物的生长繁殖，维护肠道菌群动态平衡，降低免疫应答和亚临床疾病的发生，降低霉菌毒素、氨、甲酚等有害物质对于机体免疫系统的损害，从而改善畜禽的生产性能。

5、修复创伤组织

溶菌酶还具有激活血小板的功能，可以改善局部组织血液循环障碍，分解脓液，修复创伤组织，增强局部防卫功能。对动物卵巢、产后子宫修复及肠道粘膜修复等有较好的疗效。Morgan等报道，溶菌酶可以有效防治球虫病。

三、溶菌酶作用机理

细菌细胞壁由胞壁质组成，胞壁质是由 N-乙酰氨基葡糖 (NAG)和N-乙酰胞壁酸(NAM)交替组成的多聚物，胞壁酸残基上可以连接多肽，称为肽聚糖(Peptidoglycan)。肽聚糖是细菌细胞壁的主要成分，它是由NAM、NAG和肽“尾”(一般是4个氨基酸 )组成，NAM与NAG通过β-l,4糖苷键相连，肽“尾”则是通过D-乳酰羧基连在NAM的第3位碳原子上，肽尾之间通过肽“桥”(肽键或少数几个氨基酸 )连接，NAM、NAG、肽“尾”与肽“桥”共同组成了肽聚糖的多层网状结构，作为细胞壁的骨架，上述结构中的任何化学键断裂，皆能导致细菌细胞壁的损伤。1959～1963年通过大量研究，Salton等人证明溶菌酶能有效地水解细菌细胞壁的肽聚糖，其水解位点是N-乙酰胞壁酸(NAM)的l位碳原子和N-乙酰氨基葡糖(NAG)的4位碳原子间的β-l，4糖苷键，结果使细菌细胞壁变得松弛，失去对细胞的保护作用，最后细胞溶解死亡。

    1965年，DavidPhillips和他的牛津同事等根据晶体学研究提出的底物结合方式和溶菌酶的催化作用机制，曾在各种化学实验中得到验证，生物催化作用使得溶菌酶的作用更具特色。

四、溶菌酶与抗生素配伍的增效作用：

1. 与氨基糖甙类联用，增效2～4倍；

2. 与四环素类联用，增效1～3倍；

3. 与β-内酰胺类联用，增效2～8倍；

4. 与大环内酯类联用，增效2～4倍；

5. 与喹诺酮类联用，增效0.5～2倍。

五、用法用量

溶菌酶500万u/g：建议每克兑水30--50斤。

溶菌酶1000万u/g：建议每克兑水80--100斤。

应用思路举例（500万单位）：

1.抗菌增效，加快康复。提高药物的敏感性，抑制细菌的耐药性，降低药物的毒副作用，体现产品的差异化。一般地，西药粉剂中4.0～5.0%添加量，例如，100克10%阿莫西林可溶性粉中添加5克500万单位溶菌酶（用于300斤水），对于致病性大肠杆菌等有较好的抑杀效果。

2.高端动保，绿色安全：精心设计绿色动保产品和功能性添加剂，以繁殖群体和幼龄保健为重，护佑动物健康。例如，新型抗菌抗病毒提高免疫力抗应激的绿色动保产品(以溶菌酶50万u/g制剂计，家畜150～400g/t，家禽100～300g/t)。

3.抑杀病菌，中和毒素，提高免疫，抗应激，促生长：例如组方添加溶菌酶的芪贞增免颗粒、荆防败毒散、黄芪多糖颗粒、多维素等。

杭州善牧生物工程有限公司

 楚智超 18638538862 

     Email: yangzhi120@163.com

溶菌酶酶活检测方法

 溶菌酶（500万iu/g）酶活检测方法

本品含溶菌酶(酶活力每1mg不低于5000单位)应为标示量的85.0%以上。

性状

溶菌酶为一种碱性蛋白质，常与氯离子结合成为溶菌酶氯化物。本品为白色或微黄色的结晶性或无定形粉未，无臭、味甜，水溶液遇强碱易破坏。
    本品在水中易溶，在丙酮、乙醚中不溶。

鉴别

（1）取本品10mg，溶于1ml水中，加30%三氯醋酸2滴，产生白色沉淀。

（2）取试管一支，加5%溶菌酶水溶液2滴、10%氢氧化钠5滴及1%硫酸铜溶液1滴，混匀后，应显紫玫瑰色。

检查

（1）PH值：本品的1%水溶解，PH值应为4.0～7.0（《中国兽药典》1990年版一部附录29页）

（2）炽灼残渣：不得超过10%。（《中国兽药典》1990年版一部附录39页）

（3）干燥失重：取本品0.5g，在80℃减压干燥3小时，减失重量不得过8.0%。

其它应符合粉剂项下的有关规定。

酶活力测定

1、底物的制备

菌种为溶壁微球菌（Micrococcus Lysodeiktidus），接种于固体培养基上，置35℃培养48小时，用水将菌体洗下，用纱布滤过，滤液离心后，倾去上层清液，用水洗涤菌体数次，然后用少量水悬浮，冰冻干燥，得淡黄色粉末，供测定用，保存一年。

2、样品溶液的制备

精密称取本样品4mg，加入0.1mol/L磷酸缓冲液【取磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）11.70g，磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）7.86g，乙二胺四醋酸二钠0.372g，加水溶解使成1000ml，PH为6.2】100ml溶解，即得（1ml缓冲液含有溶菌酶40μg）。

另外称取底物（即菌体）10mg，加上述缓冲液4～5ml，在匀浆器内研磨2分钟，倾出，用缓冲液稀释到50ml，悬浮液在25℃时，用分光光度法，按中国药典1977年版附录，在450nm波长处测定吸收度为0.65～0.75时，进行活力测定。

3、酶活力的测定

精密量取底物悬浮液4ml，放入比色杯中，用分光光度法，按中国药典1977年版附录，在450nm波长处测定吸收度，作为零时读数，然后量取样品溶液0.2ml（相当于8μg溶菌酶），加入比色杯中，迅速混合，用秒表计算时间，每隔30秒测定吸收度，到90秒时共记下四个吸收度读数，根据单位活力定义(在25℃，PH6.2，波长450nm时，每分钟引起吸收度下降0.001为一个酶活力单位)，按下试计算，即得。    （零时吸收度-60秒时吸收度）×(1000/样品μg数)×1000＝每1mg酶单位数

杭州善牧生物工程有限公司

 楚智超 18638538862 

   Email: yangzhi120@163.com