多克隆抗体

1. 多克隆抗体与单克隆抗体的基本概念 
克隆：指无性繁殖细胞系，是由单一的祖先细胞分裂繁殖而形成的一簇细胞纯系。在这个家族的所有成员中，如无突变发生，基因是完全相同的。 
多克隆抗体：用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺激机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物。 
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2. 图1  多抗示意图

多克隆抗体制备的主要流程包括：

①制备抗原；②选择实验动物；③动物免疫；④试取血进行测试，看看是否成功免疫；⑤如果成功免疫，处死实验动物，采集全部血清；⑥纯化出抗体；⑦鉴定抗体，包括纯度以及特异性。

制备多克隆抗体就没有单克隆抗体繁琐，只需将抗原（纯度越高越好）直接注入到动物体内进行免疫，经过3至4次免疫，ELISA测其效价合格后，收集血液离心得到上清，纯化后即能得到多克隆抗体。因此多抗制备的周期就比单抗制备的短，首次制备价格也比单抗要低。

（1）多克隆抗体的应用 

一种良好的多克隆抗血清含有抗某种抗原不同表位的多种抗体。由于多克隆抗血清通常包含抗某一抗原的不同表位的抗体，包括变性—抗性的表位，所以，在深固定的样本中也会发挥效应，在石蜡包埋组织切片的染色中，多克隆抗体常选用。根据实验的不同需要，多克隆抗体应用于相应抗原的标记。此外，在畜牧生产中，疾病的诊断及治疗，如作为蛋白类免疫抑制剂用于移植反应和自身免疫病的治疗。

 多克隆抗体特点：

免疫特异性抗体、稳定性好、免疫原纯度高、能识别抗原上多个表位。

鸡多克隆抗体简介： 
鸡多克隆抗体系使用鸡进行免疫，激活其B淋巴细胞，并在其分泌的抗体转移到卵黄后，通过每月其产的鸡蛋进行纯化获取纯化的抗体。

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可使用小分子、多肽、修饰多肽、蛋白、融合蛋白、修饰蛋白等作为抗原进行多克隆抗体制备。

鸡多克隆抗体制备服务流程：

* 定期交付的表达IgY的鸡蛋 或 纯化后的鸡源多克隆抗体

抗体的基本结构

抗体（Antibody），又称免疫球蛋白（immunoglobulins ,Ig），是机体免疫细胞被抗原激活后，B细胞分化成熟为浆细胞后所合成、分泌的一类能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。免疫球蛋白是化学结构上的概念，而抗体是生物学功能上的概念，免疫球蛋白并不都具有抗体活性，而抗体的化学基础都是免疫球蛋白。我们要研究抗体，首先需要对抗体的结构有清晰的认识。

抗体分子是机体内复杂的分子，它可以特异性地识别不同抗原，这个特性决定了抗体一级结构的多样性。

对抗体分子结构的分析发现，Ig分子的基本结构是由四条多肽链组成的。即由两条相同的相对分子质量较大的肽链（称为重链，heavy chain，H链，相对分子质量约为55000或70000）和两条相同的相对分子质量较小的肽链（称为轻链，light chain，L链，相对分子质量约为24000）组成(图1)。轻链与重链由二硫键连接形成一个称为Ig分子的四肽链分子单体，它是构成免疫球蛋白分子的基本结构。Ig单体中四条肽链两端游离的氨基或羧基的方向是一致的，分别命名为氨基端（N端）和羧基端（C端）。

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图1  抗体分子的四肽链结构

每条重链内部、每条轻链内部、每一条重链与一条轻链之间以及两条重链之间都存在二硫键；重链与轻链之间还存在非共价键作用，主要是疏水性作用。轻链与重链都含有一系列重复的、同源性的单元，每一单元大约有110个氨基酸残基，它们独立折叠成球状，称为球蛋白功能区（domain）。Ig都含有两层带有3~5股反平行的多肽链的β折叠。

抗体的生物学功能

1.特异结合相应抗原 

抗体的超变区与抗原决定簇的立体结构必须吻合才能结合，抗体与抗原的结合具有高度的特异性（图2）。抗体分子特异结合抗原后，在体内可介导多种生理和病理效应。

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图2  抗原抗体结合的高度特异性

抗体与抗原的结合靠非共价键结合，是可逆的，电解质浓度，PH，温度及抗体结构的完整性可影响抗体与抗原的结合能力。IgG的结合价是二价（图3）；IgM的结合价理论上是十价，但由于空间位阻的影响实际上为五价；二聚体IgA的结合价是四价。

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图3  IgG的抗原结合部位在空间结构上与抗原决定簇互补

抗原抗体的相互作用

抗原抗体的相互作用是免疫化学技术的基础。抗体作为一种有效的研究工具，需要知道抗体究竟是怎样与相应的抗原结合的。抗原与抗体相互作用的特点主要有以下三点。

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图    抗原与抗体的结合
1.抗原和抗体结合的特异性 

抗原决定簇和抗体的抗原结合位点之间以非共价键方式相互作用，二者在空间上必须处于紧密接触状态才能产生足够的结合力，分子间的互补结构决定了抗原抗体结合的特异性。其中抗原抗体分子间的相互作用即亲和力包括四种：氢键、离子键和疏水作用以及范德华力。

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图 抗原抗体分子间相互作用的四种类型