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用中性粒细胞分离液提取中性粒细胞过程(histopaque)

(2010-09-29 09:40:17)
标签:

健康

分类: 实验技术

一、实验所需材料:

   1、中性粒细胞分离液(histopaque

   2、全血

   3、Hanks液

   4、离心管若干

   5、离心机

   6、移液管,移液抢

二、实验步骤

  1. 将所有试剂放至室温。

  2、用离心管收集全血1-2ml       

  3、加等体积的Hanks液至全血中组成     

  4、加2ml中性粒细胞分离液至装至离心管中。

  5、将全血和Hanks液加入分离液中

  6、4℃,900r/min离心8-10min血液此时应该分为6层:血浆、单核细胞层、分离液、中性粒细胞、其余的分离液、红细胞沉淀层。如果分层不是很明显,会导致分离的细胞不纯,则需要重复分离。

  7、用吸管小心地移去上面的三层(血浆、单核细胞和分离液)

  8、小心地吸取中性粒细胞层和其下面的分离液层,转移至一个干净的离心管中。

  9、加Hanks液3ml,后4℃,900r/min离心8-10min,弃上清,留沉淀,重复2次。

  10、如果细胞用来提RNA,可加Trizol  1ml保存。

 

 

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