一、实验目的 验证酶的特异性，观察影响酶促反应的一些因素，加深对酶性质的认识。
二、实验原理
淀粉酶能催化淀粉水解，生成的麦芽糖属于还原性糖，能使班氏试剂中二价铜离子还原成一价亚铜，生成砖红色的氧化亚铜。淀粉酶不能催化蔗糖水解，所以不能产生具有还原性的葡萄糖和果糖，蔗糖本身又无还原性，故不与班氏试剂产生颜色反应。
唾液淀粉酶可催化淀粉逐步水解，生成大小不同的糊精及最后水解成麦芽糖。淀粉及糊精遇碘各呈不同的颜色反应。直链淀粉遇碘呈蓝色，糊精按分子的大小遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色。最小的糊精和麦芽糖遇碘不显色。根据颜色反应，可以了解淀粉水解的程度。由于在不同的温度、不同的酸碱度下唾液淀粉酶活性高低不同，所以淀粉水解的程度也不同。因此，通过与碘产生的颜色反应判断淀粉水解的程度，来了解温度、pH、和激活剂与抑制剂对酶促反应的影响。
三、实验材料、器材与试剂
1、材料
自制唾液稀释液。
2、器材
（1）试管及试管架；
（2）恒温水浴；
（3）沸水浴；
（4）冰浴；
（5）记号笔等,屏风。
3、试剂
（1）1%淀粉溶液；
（2）1%蔗糖溶液；
（3） pH6.8缓冲液（200mL）:0.2mol/LNa2HPO4145.5mL+0.1mol/L柠檬酸45.5mL.
(4) 班氏试剂：无水硫酸铜1.74g溶于100mL热水最后，冷却后稀释至150mL。取柠檬酸钠173g,无水硫酸钠100g和600mL水共热，溶解后冷却并加水至850mL.再将冷却的150mL硫酸铜溶液倾入。本试剂可长久保存。
（5）稀释唾液；
（6）pH5.0缓冲液（200mL）: 0.2mol/LNa2HPO4103.0mL+0.1mol/L柠檬酸97mL.
（7）pH8.0缓冲液（200mL）: 0.2mol/LNa2HPO4194.5mL+0.1mol/L柠檬酸55mL.
（8）碘液。
（9）1%NaCl溶液。
（10）1%硫酸铜溶液。
（11）1%硫酸钠溶液。
四、实验操作
1、稀释唾液的配制
将痰吐尽，用水漱口，再含蒸馏水做咀嚼运动，2分钟后吐入烧杯中，再用滤纸过滤后待用。
2、煮沸唾液的配制
取出一部分稀释唾液，放入沸水中煮沸5分钟，使唾液淀粉酶变性失活。
3、试剂中还原性物质的检查
取试管两支，分别加入蔗糖和淀粉各10滴，再分别加入班氏试剂2mL，摇匀，共置于沸水中3分钟,棉纱。溶液应保持蓝色透明，如有浑浊或沉淀，则表明试剂中哟普还原性物质存在，不能使用,滤纸。
4、酶的特异性实验
取三支试管标号后按下表加入试剂。
号
管
试
剂
试
缓冲液
（pH6.8）
淀粉溶液
（1%）
蔗糖溶液
（1%）
稀释唾液
煮沸唾液
1
20滴
10滴
-
5滴
-
2
20滴
10滴
-
-
5滴
3
20滴
-
10滴
5滴
-
各管混匀后，放入37℃水浴中保温10分钟，然后每管加入班氏试剂20滴，放入沸水中煮沸，观察结果。
5、温度对酶促反应的影响
（1）取三支试管，编号，每管加入pH6.8缓冲液20滴。1%淀粉溶液10滴。
（2）将第一支试管放入37℃恒温水浴，第二支试管放入沸水浴，第三支试管放入冰浴。
（3）放置5分钟后，分别向各试管中加入稀释唾液5滴，再放回原处。
（4）10分钟后，分别向各试管中加入碘液1滴，观察三支试管中颜色的区别，说明温度对酶促反应的影响。
6、pH对酶促反应的影响
(1) 取三支试管,编号后按下表加入各种试剂。
管
试
剂
试
pH5.0
缓冲液
pH6.8
缓冲液
pH8.0
缓冲液
淀粉溶液
1%
稀释唾液
4
20滴
-
-
10滴
5滴
5
-
20滴
-
10滴
5滴
6
-
-
20滴
10滴
5滴
（2）将上面三支试管放入37℃恒温水浴中保温10分钟。
（3）取出试管，分别加入1滴碘液，观察三支试管颜色的区别，说明pH对酶促反应的影响。
7、激活剂和抑制剂的影响
取4 支试管，编号，按照下表加入试剂。
号
管
试
剂
试
1%淀粉溶液/mL
稀释唾液/mL
1%硫酸铜/mL
1%NaCl
/mL
1%硫酸钠/mL
蒸馏水/mL
7
1.5
0.5
0.5
-
-
-
8
1.5
0.5
-
0.5
-
-
9
1.5
0.5
-
-
0.5
-
10
1.5
0.5
-
-
-
0.5
将上面4支试管放入37℃恒温水浴中保温10分钟。取出分别滴加碘液2～3滴，摇匀，观察现象，说明原因。 相关的主题文章：

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