发展历程

       随着科技的发展，生产肽的方法也在不断发展。五六十年代，主要是从动物脏器获取肽。如胸腺肽，其生产方法是将刚生下来的小牛宰杀之后，割下其胸腺，然后用震荡分离的生物技术，将小牛胸腺中的肽震荡分离出来，制成胸腺肽针剂。这种胸腺肽主要用于人体免疫。现如今，这种肽已处于淘汰状态。世界上曾经一度流行的疯牛病，这种病毒主要吞噬动物大脑中的蛋白质，破坏其脑组织、细胞及神经。人体一旦染上此病毒，比患上癌症还可怕，最终成为“植物人”或很快死亡。还有从人体血液中提炼出来的肽 ，其副作用也很大，它不仅容易使人体染上甲肝、乙肝、丙肝、丁肝、艾滋病毒、性病病毒，而且有排异过敏反应，这种反应一旦出现，生命就危在旦夕。

合成方法

固相合成法、液相合成法

       以氨基酸为原料定向合成某种单肽，属医药原料中间体，主要用于西药配方，以增强药效、增强人体对药的吸收速度和吸收率。

酸解法或碱解法

       这种肽主要出现在日本。用酸解法生产的大豆多肽，属食品添加剂，主要用于老人和儿童食品，其目的是增强这两种人群对食品营养的吸收。世界上拥有“大豆多肽”的国家只有日本和中国。但其所用的原料、水解法和产品性质大有不同。日本所用原料是豆粕，水解方法是酸法，生产的肽酸性化学物质难以除尽，而且有苦味，需用活性炭吸附、脱苦，而活性炭免不了会侵入肽体。

酶法生产的生物活性肽

       酶法生产的生物活性肽。这种肽主要产在中国，代表着当今世界肽研究、开发、生产、创新的水平和潮流。酶法生产的生物活性肽是用人体所需要的食品级植物蛋白酶，将人体平常所食的食物蛋白质酶解成小分子活性多肽。它具有生物活性和多样性，已在世界范围内引起关注，成为当今世界追崇的热点。

合成过程

具体合成由下列几个循环组成：

除去保护

Fmoc保护的柱子和单体必须用一种碱性溶剂（piperidine）去除氨基的保护基团。

激活和交联

       下一个氨基酸的羧基被一种激活剂所激活。化学工艺常用HBTU/HCTU/HITU/HATU+NMM/DIPEA或HOBT+DIC作激活剂，激活的单体与游离的氨基反应交联，形成肽键。在此步骤使用大量的超浓度试剂驱使反应完成。循环：这两步反应反复循环直到合成完成。 氨基酸缩合结束后，可用适量TFA进行洗脱，根据起酸碱性，可选择10%TFA/DCM溶液，至100%TFA，以此类推。

HPLC分析纯化

       分析HPLC使用柱子和泵系统，可以经受传递高压，这样可以用极细的微粒（3-10μm）做填料。由此多肽要在几分钟内高度被分析。HPLC分两类：离子交换和反相。 离子交换HPLC依靠多肽和固相间的直接电荷相互作用。柱子在一定PH范围带有特定电荷衍变成一种离子体，而多肽或多肽混合物，由其氨基酸组成表现出相反电荷。分离是一种电荷相互作用，通过可变PH，离子强度，或两者洗脱出多肽，通常，先用低离子强度的溶液，以后逐渐加强或一步一步加强，直到多肽火柱中洗脱出。离子交换分离的一个例子使用强阳离子交换柱。如sulfoethylaspartimide通过酸性pH中带正电来分离。

       反相HPLC条件与正常层析正相反，多肽通过疏水作用连到柱上，用降低离子强度洗脱， 如增加洗脱剂的疏水性。通常柱子由共价吸附到硅上的碳氢烷链构成，这种链长度为G4-G8碳原子。 由于洗脱是一种疏水作用。长链柱比短链对小的， 高带电肽好。另一方面大的疏水肽用短链柱洗脱好。 然而，总体实践中， 这两类柱互变无多少显著差别，别类载体由碳水化合物构成， 比如苯基。

       典型的操作常由两绶冲剂组成，0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用线型梯变以每分钟0.5%到1.0%改变的速度混合。常见分析和纯化用柱为4.6×250mm（3-10μm）和22×250mm（10μm）。如果用径向填柱，那么大小是8×100（3-10μm）和25×250mm（10μm）。

       大量各种缓冲剂含许多不同试剂，比如磷酸、NH4HCO3、 醋酸钠、TFA/TEA，磷酸钠、异戊酚等。这样许多不同组合可形成缓冲剂，但要注意：硅反相柱料不能长时间暴露于高pH，甚至微碱pH， 因为这样会破坏柱子。

       此外，不要把肽含量和纯度搞混了，肽的纯度可能是100%， 而肽含量相关带电基团（如Arg, Lys ）的抗离子量和肽亲水性决定，这是合成肽的本身特性。