邻二氮菲分光光度法测定微量铁

一、           目的要求

1、了解邻二氮菲测定铁的基本原理及基本条件，学习显色溶液的制备操作技术；

2、掌握吸收曲线的测绘和测量波长的选择；

3、掌握标准曲线定量的实验技术；

4、了解721型分光光度计的使用方法。

二、           基本原理

邻二氮菲（又称邻菲罗啉）是测定微量铁的一种较好的显色剂。在PH4~6的溶液中，邻二氮菲与Fe²⁺生成稳定的橙红色络合物。

橙红色络合物的最大吸收波长在510nm处，摩尔吸光系数  ε510   =1.1×10⁴  ， 反应的灵敏度、稳定性、选择性均较好。

此反应可用于微量Fe ²⁺  的测定，如果铁以Fe ³⁺   的形式存在，则应预先加入还原剂盐酸羟胺或对苯二酚将Fe ³⁺还原成Fe ²⁺ ，

                   4Fe³⁺+2NH₂OH           4Fe ²⁺ +N₂O +H₂O +4H⁺

                             (盐酸羟胺)                      

三、           仪器与试剂

1、仪器

721型分光光度计

容量瓶50ml：7个；吸量管5ml：4支；吸量管10ml：1支。

2、试剂

10μg/ml铁标准溶液：准确称取0.8634g NH₄Fe(SO₄)₂.12H₂O，置于烧杯中，以50ml 1mol/L HCL 溶液溶解后转入1000ml 容量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀。从中吸取50ml该溶液于500ml容量瓶中，加50ml 1mol/L HCL 溶液，用水稀释至刻度，摇匀。

10g/L盐酸羟胺溶液（临用时配制）。

1g/L邻二氮氮菲溶液（临用时配制）：应先用少许酒精溶解，再用水稀释。

NaAc-HAc缓冲溶液（PH=4.6）：将30ml冰醋酸和30g无水醋酸钠溶于100ml水中，稀释至500ml。

铁试样溶液：其中含铁0.02~0.06mg/10ml。

四、           实验步骤

⑴ 显色溶液的配制：取50ml容量瓶7个，分别准确加入10μg/ml的铁标准溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00（ml）及试样溶液10.00ml，再于各容量瓶中分别加入10g/L盐酸羟胺2.5ml，摇匀，稍停2min，再各加入NaAc-Hac缓冲溶液5ml及1g/L邻二氮氮菲溶液5ml，每加一种试剂后均摇匀再加另一种试剂，最后用水稀释到刻度，摇匀。

⑵测绘吸收曲线并选择测量波长：选用加有3.00ml铁标准溶液的显色溶液，以不含铁的试剂溶液为参比，用3cm比色皿，721型分光光度计上从波长450~550nm间，每隔20nm测一次吸光度，在最大吸收波长左右，再每隔5nm各测一次。注意：每改变一次波长，均需用参比溶液将透光率调到100%。然后才测吸光度。以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸光曲线。选择吸收曲线的峰值波长为本实验的测量波长。

⑶吸光度的测定：在选定波长下，用3cm比色皿，以不含铁的试剂溶液作参比溶液，测量各个显色溶液的吸光度。

五、           数据记录和处理

（1）    数据记录

 仪器型号 721，比色皿厚度  3 cm