梯度稀释和平板技术

一、实操目的：

 学习并掌握微生物的平板菌落计数法。

二、实操原理：

 微生物如细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等活体数量的测定方法，常用平板培养计数法。它是通过将样品制成均匀的一系列不同稀释度的稀释液（使样品中的微生物细胞充分分散，成单个细胞存在），再取一定的稀释液接种，使其均匀分布于培养皿中特定的选择性培养基内，最后根据在平板上长出的菌落数计算出每克或每毫升样品中的微生物数量。

三、仪器：

超净工作台、电炉、培养箱、试管、10ml移液管、1ml移液管、洗耳球、试管架、锥形瓶、平皿

四、试剂：样品：酱油 ，无菌水， 营养琼脂

五、实操过程：

1、溶解培养基：将固体培养基放在电炉上煮沸，然后冷却至41~43℃待用

2、取10ml移液管分别吸取9ml水放入3支试管中

3、取1ml移液管吸取1ml酱油加入第一支试管内，另取第二支1ml移液管插入第一支试管内，吸取溶液后放出溶液，重复3次，使酱油混合均匀后，再分别吸取1ml加入到第二支试管和第一个平皿内；取第三支1ml移液管插入第二支试管内吸取溶液，然后放出溶液，重复三次 ，使溶液混合均匀，然后分别吸取1ml溶液分别加到第三支试管和第二个平皿内；取第四支1ml移液管插入第三支试管内吸取溶液，然后放出溶液，重复三次，使溶液混合均匀，再吸取1ml放入第三个平皿内，贴好标签

4、倒培养基：在平皿内倒入其2/3体制的培养基，用手轻轻摇匀

5、待琼脂培养基凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，取出计算平板内菌落数目

六、实操结果及分析讨论

1.平板菌落数量和生长描述：

培养时间：24小时

2.样品细菌浓度的计算

      根据上面的数据可得样品的细菌浓度=35×10=3.5×10 ²个/ml

3.器皿的使用

4.结果和讨论