酵母细胞固定化技术

一、  实验原理

固定化酶和固定化细胞是利用各种不同方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括包埋法、吸附法和结合法。一般来说，细胞更适合采用包埋和吸附法固定化。这是因为细胞个大，而酶分子很小；个小的酶容易从凝胶孔径中漏出。
　　包埋法固定化细胞即将细胞包埋在多孔载体内部而制成固定化细胞，常用凝胶包埋法。常用的载体有聚丙烯酰胺、海藻酸钙凝胶、角叉菜胶、光交联树脂等。

二、  实验器材

1、  菌种 干酵母

2、  仪器或其他用具  电子天平，量筒，250mL、50mL烧杯，250mL三角瓶，培养箱、酒精计等。

三、  操作步骤

1．活性干酵母的活化

用电子天平各称取1.0g 干酵母，分别放在两个250mL 三角瓶中用50mL 浓度为2%的蔗糖溶液在30℃恒温活化30min，分别编号1、2备用。

2. 海藻酸钠-酵母菌悬液制备

用10mL 蒸馏水加热溶解0.7g海藻酸钠，将增殖酵母菌液1与海藻酸钠溶液充分混合均匀，形成海藻酸钠-酵母菌悬液。

3. 酵母细胞的固定化

称取无水氯化钙，配制成2%的氯化钙溶液，将海藻酸钠—酵母菌悬液滴入氯化钙溶液中造粒，并恒温（20℃）维持2h，使酵母充分固定化。倾去上清液，用蒸馏水冲洗固定化酵母3次，然后重新置于2%的氯化钙溶液中平衡24h后，备用。

4. 固定化酵母的发酵试验

将固定化好的酵母置于100mL，pH5.0 的发酵培养基中，放置于温度调节为30℃的电子恒温培养箱中进行发酵，定时记录发酵液糖度或酒精度的变化。