如何保证生化(酶活)测定试验平行性
(2011-05-16 17:14:43)
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酶活测定平行生化试验教育 |
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平行试验就是同一批号(炉号等)取两个以上相同的样品,以完全一致的条件(包括温度、湿度、仪器、试剂,以及试验人)进行试验,看其结果的一致性,两样品间的误差是有国标或其他标准要求的。 平行试验的优点是防止偶然误差的产生,检验系统和人员操作是否可靠。
为了提高试验结果的一致性性,生化(酶活)平行试验的注意事项有:
1、取样量保持一致,这包括样品称取、反应试剂加样量等,尽量采用高精密度的工具,比如移液器等等;
2、各液移取后,立即充分混匀,特别是抑制酶活的操作步骤;
3、酶活反应时间保持一致,如果只有几分钟的酶促反应时间,则应该精确到秒;
4、平行试验必须在同一时间、同一设备、同一试验系统下完成,不得更换设备检测;
5、排除一切干扰酶活的因素,比如残留的酸碱等等;
6、一般至少平行三次;
7、尽量使用同一批次的试剂,试验周期紧凑,防止药品自然变化。
平行试验有误差在所难免的,偏差值的位置如果是在居中的位置很有可能是操作误差,如果是在最高点或者次高点的话,那就要考虑了,不一定趋势就一定要成直线关系,严谨起见可以做再做一次验证下。
附录:
偶然误差(随机误差):在测量时,即使排除了产生系统误差的因素(实际上不可能也没有必要绝对排除),进行了精心的观测,仍然会存在一定的误差,这类由于偶然的或不确定的因素所造成的每一次测量值的无规则变化(涨落),叫做偶然误差,或随机误差。
产生偶然误差的原因很多,例如观测时目的物对得不准,读数不准确,周围环境的偶然变化或电源电压的波动等因素的影响,难以确定某个因素产生的具体影响的大小。
偶然误差的存在使每次测量值偏大或偏小是不定的,但它并非毫无规律,它的规律性是在大量观测数据中才表现出来的统计规律。在多数物理实验中,偶然误差表现出如下的规律性:①绝对值相等的正的和负的误差出现机会相同;②绝对值小的误差比绝对值大的误差出现的机会多;③误差不会超出一定的范围。
设n次测量值N1、N2、……、Nn的误差为ε1、ε2、……、ε3,真值为N′,则 (N1-N′)+(N2-N′)+……+(Nn-N′)=ε1+ε2+……εn。 将上式展开整理后,等式两边分别除以n,得出1/n(n1+n2++……+Nn)-N′=1/n(ε1+ε2+……εn)。
上式表明,平均值的误差等于各测量值误差的平均。由于测量值的误差有正有负,相加后可抵消一部分,而且n越大相抵消的机会越多。
因此我们可推断出以下结论:①在确定的测量条件下,减小偶然误差的办法是增加测量次数。②在消除数据中的系统误差之后,算术平均值的误差将由于测量次数的增加而减小,平均值即趋近于真值。因此可取算术平均值作为直接测量的最接近的真值(最佳值)。