成骨和成脂诱导是鉴定干细胞的一种重要的方法，也是最常用、报道见得最多的方法。成骨最常用的染色方法是茜素红染色，成脂诱导最常用是Oil Red O（油红O）染色法。下面我介绍一下这两种染色方法的原理和步骤。

    茜素红染色方法和原理：成骨诱导的过程是使钙离子能够以钙盐的方式沉淀下来，这就是我们常说的“钙结节”。鉴定钙结节的染色方法常用“茜素红”。

步骤：

1.         吸去诱导液，再PBS洗一到两次；

2.         加入10％中性甲醛，固定30min-60min；

3.         吸去固定液，加入0.1%的茜素红染色液，染色6-10min；

4.         用PBS洗两次，去处残留的染色液；

5.         加入PBS，完成染色；

   茜素红：茜素磺酸钠，茜素S，茜素红S，茜素胭脂红，1,2-二羟基蒽醌-3-磺酸钠，1,2-二羟基蒽醌-3-磺酸钠盐。

分子结构：

橙黄色或黄棕色粉末。易溶于水，微溶于乙醇，不溶于苯和氯仿。1%水溶液pH为2.15，其水溶液呈浅黄褐色，加盐酸后变成黄色，加氢氧化钠后则变成蓝紫色。有刺激性。能与许多金属离子生成带色化合物，能与锆、钍、铝、钛及铍和钙的显色反应。

染色的原理就是茜素红和钙发生显色反应，产生一种深红色的带色化合物，这样成骨诱导的细胞外面沉积的钙结节也就被染成了深红色。