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(2013-04-09 20:42:14)| 分类： 生物教学 |
基因工程中如何获取目的基因：
6．天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是
A．提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因B
B．利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因B
C．利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞
D．将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞
【答案】A
A．提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因B
B．利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因B
C．利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞
D．将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞
【答案】A
（小黑牛网友）如何从基因文库中找到所需要的基因？
从基因文库中找到目的基因是一件比较复杂的事情，要根据目的基因已有的某些信息来进行。下面介绍一种根据基因的部分核苷酸序列找到目的基因的方法。
第一步，通过PCR方法将目的基因已知的部分核苷酸序列扩增出来，进行放射性同位素标记（也可以用别的标记方法进行，如生物素、荧光素等），即用标记了放射性同位素的目的DNA片段作为探针，与扩增出来的DNA杂交。
第二步，将基因文库中的所有菌落转移至硝酸纤维膜上（也可以用其他类型的膜），然后，通过处理溶解消化掉细菌中的蛋白质，并使DNA固定在膜上。
第三步，按Southern杂交的方法进行杂交。（Southern杂交──DNA和DNA分子之间的杂交）
第四步，在X光底片上出现黑斑的菌落，这表明这个菌落中含有所需要的目的基因（若选用别的标记方法，有阳性信号的菌落则含有所需要的目的基因）。
第五步，从该菌落中再提取目的基因。
资料来源：《教师用书》现代生物科技专题(选修3)
从基因文库中找到目的基因是一件比较复杂的事情，要根据目的基因已有的某些信息来进行。下面介绍一种根据基因的部分核苷酸序列找到目的基因的方法。
第一步，通过PCR方法将目的基因已知的部分核苷酸序列扩增出来，进行放射性同位素标记（也可以用别的标记方法进行，如生物素、荧光素等），即用标记了放射性同位素的目的DNA片段作为探针，与扩增出来的DNA杂交。
第二步，将基因文库中的所有菌落转移至硝酸纤维膜上（也可以用其他类型的膜），然后，通过处理溶解消化掉细菌中的蛋白质，并使DNA固定在膜上。
第三步，按Southern杂交的方法进行杂交。（Southern杂交──DNA和DNA分子之间的杂交）
第四步，在X光底片上出现黑斑的菌落，这表明这个菌落中含有所需要的目的基因（若选用别的标记方法，有阳性信号的菌落则含有所需要的目的基因）。
第五步，从该菌落中再提取目的基因。
资料来源：《教师用书》现代生物科技专题(选修3)
1.包含生物全部基因的文库称为基因组文库，只包部分基的文库称为基因文库,比如cDNA文库，就是一种部分基因组文库。
2.构建的文库,实际上是一组微生物构成的整体,构建文库时,先提取DNA,打成小片段(超声波或限制酶水解),和载体结合,再转到受体生物中。第一，构建文库的工作量是非常大的，尤其是基因组文库，为了确保包含全部基因，需要培养万个以上的受体微生物，第二，基因存于载体上，所以从构建的文库上获取目的基因，也应该用限制酶，第三，不同的个体性状不同基因不同，构建的文库也不同，要获取蓝色基因自然要用开蓝色花的矮牵牛个体构建文库，所以B选项说法讲的通
3，如果已知序列详情，用PCR法获得基因（根据序列设计引物），相比较而言简单快捷多了。既然简单，那为什么还有构建文库的方法？第一，很多基因不知道序列详情，第二，PCR扩增的长度有限，一般超过1500bp就很困难了，很多基因比这个大多了，所以大的基因还要用构建文库法，所以才有教师用书的补充材料，这中情况下工作很大，要对整个库筛一下，基因大，有肯能被打成几段，存在于多个菌株中，
综合来看，我倾向于选A，因为PCR简单。
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