加载中…质粒的转化及挑菌
(2018-11-14 14:27:49)这个实验流程包括质粒的转化到挑菌这一步。
第一步：转化
1.
质粒1uL加入10ul的感受态细胞中，冰上放置40min。
低温的作用是让DNA-CaCl2复合体粘着在菌体表面。
2.
42水浴锅内热激90s（让质粒进入感受态细胞）。
短暂热激的作用是让菌壁通透性改变，再经过2min左右冰上静置，附着在表面上的DNA就进入菌体了。
3.
取出，冰上放置5min（让感受态细胞关闭）。
4. 加入1mL
LB液体培养基（无抗性AMP），37摇床培养1h。
5.
8000转离心5分钟，弃去900uL，剩下100uL，并混匀。
第二步：涂板
吸取1uL菌液加到含AMP（AMP通常是1000X的，1mL的培养基加1uL即可）的LB固体培养基上，涂匀，放37度过夜。
第三步：挑菌
第二天晚上五点挑菌，用一个2.5uL的枪头在单一菌落上点一下即可，打入培养基中。其中，培养基体积为5mL，
加入5uL的AMP，放摇床培养，37过夜。
第二天提取质粒或保藏。
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