[1] 实验目的

1、  学习神经干标本的制备；

2、  观察坐骨神经干的单相、双相动作电位、双向性传导并测定其传导速度；

3、  观察机械损伤对神经兴奋和传导的影响；

4、  学习绝对不应期和相对不应期的测定方法；

5、  了解蛙类坐骨神经干产生动作电位后其兴奋性的规律性变化。

[2] 实验原理

1、  用电刺激神经，在刺激电极的负极下神经纤维膜内产生去极化，当去极化达到阈电位，膜上产生一次可传导的快速电位反转，即动作电位。神经干由许多神经纤维组成。其动作电位是以膜外记录方式记录到的复合动作电位；

2、  如果两个引导电极置于兴奋性正常的神经干表面，兴奋波先后通过两个电极处，便引导出两个方向相反的电位波形，称双相动作电位；

3、  如果两个引导电极之间的神经纤维完全损伤，兴奋波只通过第一个引导电极，不能传至第二个引导电极，则只能引导出一个方向的电位偏向波形，称单向动作电位；

4、  动作电位在神经干上的传导有一定速度,不同类型的神经纤维传导速度不同，主要取决于神经纤维的直径大小、有无髓鞘、环境温度的高低等因素。将神经干搭在两对电极上，测量两对电极之间神经干的距离，再测量出显示屏上冲动通过这段距离所消费的时间，就可以计算出传导速度；

5、  神经组织在接受一次刺激产生兴奋后，其兴奋性将会发生规律性的变化，依次经过绝对不应期（有效不应期）、相对不应期、超常期和低常期，然后回到正常水平。采用两次脉冲，通过调节两次脉冲间隔，可测得坐骨神经的有效不应期和相对不应期。

[3] 实验材料

蟾蜍、任氏液、蛙板、探针、粗剪刀、细剪刀、尖镊子、玻璃分针、大头针、培养皿、滴管、 瓷碗、锌铜弓、铁支架，张力换能器，RM6240多道生理信号采集与处理仪等。

[4] 实验步骤

1、坐骨神经标本制备

  ①破坏脑脊髓

②剪除躯干上部及内脏并去皮

③分离两腿并游离坐骨神经至足趾

④清洗器械

⑤完成坐骨神经标本

2、连接实验装置

3、神经干动作电位的测定

4、神经干兴奋传导速度的测定

5、神经干兴奋不应期的测定

[5] 实验结果

1、双向动作电位产生的阈刺激和最适刺激

http://s7/middle/5d188bc4tadd56d2abab6&690
                                       图1、阈刺激

设定初始刺激强度为0.05mv，强度递增值为0.005mv，当强度增加至0.085mv时，开始产生动作电位，因此该双向动作电位的阈刺激值为0.085mv。
http://s15/middle/5d188bc4tadd56d3a010e&690

                                                                                           图2、最适刺激

当强度递增至0.205mv时，双向动作电位的幅度不再发生变化，说明此时的刺激强度达到了最适刺激强度。

2、动作电位传导速度

http://s14/middle/5d188bc4tadd56d58706d&690

图3、传导速度

给予蟾蜍坐骨神经正电压单刺激，初始强度设为1mv，将通道2内的双向动作电位图合并到通道1中，记录电极距离为0.02m，传导时间为1.00ms，算出传导速度为20m/s 。

3、神经干兴奋不应期

设定刺激强度为最适刺激强度：1mv

当第二个刺激引起的动作电位幅度开始降低时，即第二次刺激比第一次刺激引起的动作电位幅度小的时候，此时两个波的间隔为不应期。有效不应期的实验截图没有记录下来，这里假设不应期时长6.5ms。当第二个波刚刚消失时的波间隔视为绝对不应期的近似值，如下图所示为0.5ms。

故：有效不应期：6.5ms（未记录，假设值）；绝对不应期：0.5m，相对不应期：6.5-0.5=6.0ms
http://s4/middle/5d188bc4tadd56d7704b3&690

                                                                                图4、绝对不应期

4、单相动作电位
http://s4/middle/5d188bc4tadd56d864b83&690

                                                                              图5、单相动作电位

    在通道1和通道2内截断神经，可测到如上单相动作电位。

[6] 问题分析

    1、坐骨神经标本制备不熟练；

    2、实验进行时未记录不应期，只记录了绝对不应期，未完全理解不应期的测量方法；

    3、记录最适刺激和阈刺激的时候，由于是手动控制，可能会由于视觉误差导致测量值不准确

    4、测量神经干传导速度时候，由于传导时间是手动标量，可能导致速度有误差。

[7] 思考题

    1、单相、双相动作电位的形成？

两个引导电极置于兴奋性正常的神经干表面，兴奋波先后通过两个电极处，便引导出两个方向相反的电位波形，即双相动作电位；两个引导电极之间的神经纤维完全损伤，兴奋波只通过第一个引导电极，不能传至第二个引导电极，则只能引导出一个方向的电位偏向波形，称单向动作电位。

 2、动作电位传导速度测定的原理和常见的影响因素

      动作电位在神经干上的传导有一定速度,不同类型的神经纤维传导速度不同，主要 取决于神经纤维的直径大小、有无髓鞘、环境温度的高低等因素。将神经干搭在两 对电极上，测量两对电极之间神经干的距离，再测量出显示屏上冲动通过这段距离 所消费的时间，就可以计算出传导速度。

 3、绝对不应期和相对不应期形成的原因

      绝对不应期是指细胞发生兴奋后一段时间，兴奋部位对继之而来的刺激，无论多强均无兴奋。这是由于这一时间内向电流通道处于开放后的暂时失活状态，在膜电位复极至-40mv水平的时期内，纳通道无法再被打开，也不能发生钠离子进一步内流；

      相对不应期是钠通道处于部分失活，部分复活的状态。只有膜电位复极至接近静息电位时，才能使钠通道完全恢复。

4、  影响实验结果的主要干扰因素

①分离出的神经干的长短；②标本制备时是否一直保持标本湿润；③标本制备时尽量避免使用尖锐的器械，以免损伤神经；④使用电刺激时，刺激强度不宜太大，否则可能导致神经的损伤；⑤注意接地，防止干扰。