一、实验原理

固定化酶和固定化细胞技术是利用物理或者化学的方法将酶或者细胞固定在一定空间内的技术，包括包埋法，化学结合法（将酶分子或细胞相互结合，或将其结合到载体上）和物理吸附法固定化，细胞多采用包埋法固定化。因为细胞个大，而酶分子很小，个大的细胞难以被吸附或结合，而个小的酶容易从包埋材料中漏出。

常用的包埋载体有明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等。本实验选用海藻酸钠作为载体包埋酵母细胞。

二、实验目的

1、了解细胞固定化的原理；

2、掌握酵母细胞固定化实验操作。

三、仪器与用具

水浴锅，20mL注射器，烧杯，三角瓶，玻璃棒

酵母悬液，海藻酸钠，无水氯化钙，葡萄糖

四、试剂配制

CaCl₂溶液：称取0.83g无水氯化钙加150mL水溶解待用；

海藻酸钠溶液：称取0.7g海藻酸钠加入10mL水加热溶解成糊状；

10%葡萄糖溶液：称取15g葡萄糖溶于150mL水中。

活化酵母液：取1g酵母加入10mL蒸馏水，搅拌，混合均匀成糊状，放置1h使其活化。

五、实验方法与步骤

1. 海藻酸钠溶液与酵母细胞混合：将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入实验前已经活化的酵母细胞，用玻璃棒充分搅拌混合均匀。

2. 固定化酵母细胞：用20mL注射器吸取海藻酸钠与酵母细胞混合液，在恒定的高度（建议距液面12～15cm处，过低凝胶珠形状不规则，过高液体容易飞溅），缓慢将混合液滴加到CaCl₂溶液中，观察液滴在CaCl₂溶液中形成凝胶珠的情形。将凝胶珠在CaCl₂溶液中浸泡30min左右使其充分固定。

3. 固定化酵母细胞发酵：用5mL移液器吸取蒸馏水冲洗固定好的凝胶珠2～3次，然后加入装有150mL10%葡萄糖溶液的三角瓶中，置于25℃发酵24h，观察结果。

固定化酵母细胞发酵葡萄糖溶液前

http://s1/mw690/5ce92d98te07e4e50bcf0&690实验报告" TITLE="酵母细胞的固定化实验过程 实验报告" />
固定化酵母细胞发酵葡萄糖溶液后

实验开始时，凝胶球是沉在烧杯底部（图4），24h后，凝胶球浮在溶液悬浮在上层（图5），而且可以观察到凝胶球并不断产生气泡，说明固定化的酵母细胞正在利用溶液中的葡萄糖产生酒精和二氧化碳，结果凝胶球内包含的二氧化碳气泡使凝胶球悬浮于溶液上层。