实验六 脲酶测定

一、实验原理

有些生物化学反应中指示反应完成，经常使用直观的指示剂指示，如氧化还原指示剂和酸碱指示剂。氧化还原指示剂是氧化状态下和还原状态下各有不同颜色；酸碱指示剂是指示生物化学反应前后溶液的酸碱度变化，不同酸碱度各有不同颜色。

这里进行一次酶促反应试验，人的血液中和尿液中都含有尿素，尿素的含量变化是许多病变的重要指标。尿酶可作用于尿素，它的反应如下：

(NH₂)₂C=O  + H₂O       尿 酶      2NH₃  +  CO₂

尿酶可以定量测定尿素含量，尿酶通常可从大豆粉中提取，本试验用大豆粉和玉米粉提取尿酶，通过上述反应观察两种植物种子中尿酶的含量。在与底物尿素的作用反应中，分别加入三种指示剂A、B、C，但在制备指示剂的过程中忘记了瓶号，只知道三种是中性红、百里香酚兰和亚甲兰，其中有酸碱指示剂和氧化还原指示剂。

二、实验目的

1. 确定两种植物种子中谁含大量的脲酶；

2. 分出谁是氧化还原指示剂，谁是酸碱指示剂。

三、实验器材及试剂

1.仪器设备

电子天平，4只100ml三角瓶，14支试管，试管架，2个三角漏斗，50ml量筒，玻璃棒，移液器及吸头，脱脂棉

http://s8/mw690/5ce92d98td157cc20dee7&690

2.试剂

30%乙醇溶液，2%尿素溶液，指示剂A,B,C(中性红，亚甲蓝，百里香酚蓝）

3.材料

大豆粉，玉米粉

四、实验方法及步骤

1、用1/100电子天平称取大豆粉和玉米粉各2克分别放入两个100ml的三角瓶中，用量筒量取40ml 30%的乙醇溶液，搅拌或震荡悬浮，放置10分钟，提取脲酶。

2、将三角玻璃漏斗放在另一组（2个）清洁的三角瓶上，再将少许脱脂棉轻压放到漏斗内，分别将上述提取悬液倒入三角玻璃漏斗中用脱脂棉过滤。弃沉淀，回收滤液，滤液即脲酶提取液。滤液不一定清澈透明，不影响测定。

3、取2组试管每组7支,标号，依表1加入各种试剂。在试剂加入后混匀，静置10分钟观察颜色变化，并将颜色变化写入表1。

五、实验结果与分析

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图1 脲酶与尿素反应指示剂变化图像（上排加大豆提取液，下排加玉米提取液）

如图1实验指示剂变色结果证明：加玉米提取液的指示剂不变色，没有发生生化反应，说明玉米中不含脲酶；加大豆提取液的指示剂发生颜色变化，说明大豆中可以提取出脲酶，即大豆中含脲酶比玉米多；指示剂A是中性红，指示剂B是百里香酚蓝，指示剂C是亚甲蓝。

六、建议课时安排

建议试验时间1小时

七、回答问题

1. 大豆粉和玉米粉中谁含有最多的脲酶？

A.大豆粉            B.玉米粉

2. 脲酶对尿素的作用是否是氧化还原反应？

A.是                B.否

3. 三种指示剂中哪种是酸碱指示剂？

A.中性红            B.百里香酚兰           C.亚甲兰

4. 如果一个酶促反应，其产物是碱性物质，这里有三种酸碱指示剂，它们的变色pH范围如下，你选择哪种物质为指示剂？

 A.间甲酚紫    pH 1.2-2.8        B.甲基橙   pH 3.1-4.4

C.酚红        pH 6.4-8.2

5. 在生化反应的指示中，酸碱指示剂是否参与这一生化反应？

A.参与              B.不参与

6. 在生化反应的指示中，氧化还原指示剂是否参与这一生化反应？

A.参与              B.不参与

7.为什么过滤的时候用脱脂棉而不用滤纸？

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