1、接种一单菌落于5mlLB中,30℃培养过夜。

2、取1ml种子培养液接入100ml 2%LB中,37℃、220r/min培养16小时;

3、5000r/min离心10分钟,弃去上清。

4、加入10mlTE离心洗涤后，用10mlTE溶解菌体,混匀,-20℃保存备用。

5、取3.5ml菌悬液，加入184μl 10%SDS，混匀，加入37μl10mg/ml蛋白酶K，混匀，37℃温育1小时

6、加入740μl 5mol/LNaCl，再加入512μl CTAB/NaCl （质量浓度50 g/ L CTAB ,0.5 mol/ L NaCl）, 混匀，65℃温育10分钟。

7、加入等体积的氯仿/异戊醇（24：1），混匀，10000r/min离心5分钟，保留上清。

8、上清中加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1）,混匀,10000r/min离心5分钟,保留上清。

9、加入0.6倍的异丙醇,混匀,10000r/min离心5分钟，收集DNA沉淀，用70%乙醇离心洗涤DNA沉淀。

10、用1mlTE溶解DNA,加入终浓度为20μg/mlRNaseA,4℃保存。

CTAB/NaCl法提取的DNA纯度较高，蛋白杂质较少，保存时间长，编者更喜欢把终浓度为20μg/ml RnaseA加在第5步温育的时候，这样最后没有RnaseA污染。每一步操作细致一些，得到的DNA可用于Southern blot。
编者建议：长时间保存DNA可放于-20℃，但要尽量减少反复冻融，否则影响DNA质量

革兰氏阳性菌，由于细胞壁的结构与阴性菌有差别，裂解比阴性菌稍微麻烦一些，可以采取CTAB/NaCl法稍加修改，在第四步加入终浓度2mg/ml的溶菌酶，37度温育1h。

实验注意：提基因组最好要将枪头尖剪掉（剪掉以后在酒精灯上迅速过一下，使其断口圆滑）。以免枪头损伤基因组！抽干时最好是风干！