【目的和要求】

    熟练掌握利用紫外分光光度法测定DNA的纯度和浓度。

【实验原理】

核酸具有吸收紫外光线的能力，在波长为260nm的条件下具吸收峰值，而蛋白质在280nm时具有吸收峰值。根据经验数据，纯核酸溶液OD₂₆₀=1.8~2.0时，认为已达到所要求的纯度。在样品中含有蛋白质等杂质时，会使OD₂₆₀/OD₂₈₀的比值下降。用此法测定时，只能区别核酸和蛋白质，而无法区别质粒DNA与染色体DNA及RNA。

【计算】

DNA浓度（μg/mL）=OD₂₆₀稀释倍数/0.026×L

DNA纯度= OD₂₆₀/ OD₂₈₀（要求比值在1.8~2.0范围内）

注：L为比色杯厚度（cm,一般为1cm。）

核酸和蛋白质的吸光度

【操作步骤】

1、取石英杯两只，分别加入TE缓冲液2990μl。

2、在对照杯中加入10μl TE buffer,在样品杯加入10μl样品。盖上盖子，上下几次摇匀。

3、放入751型分光光度计的比色槽中，使用氢灯，分别测出OD₂₆₀和OD₂₈₀的值。

4、按上述计算公式算出你所制备的DNA的纯度和浓度。