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植物膜蛋白提取试剂盒

(2022-03-19 09:07:46)
标签:

植物膜蛋白提取试剂盒

产品简介:

植物膜蛋白提取试剂盒是一种提取和稳定膜蛋白的试剂盒。该试剂盒可以从植物组织中高效提取和稳定G偶联蛋白受体(GPCR)和其他膜相关蛋白,同时保持长期的受体完整性。萃取剂可以将受体包裹在去污剂胶束中,4°C下储存长达1-20°C下储存1个月时具有受体功能。在提取后如何稳定天然和功能形式的受体存在许多挑战,这使得在细胞膜外进行研究变得极为困难。这种提取试剂能够在1-2小时内从植物细胞或组织中有效提取功能受体大多数功能性GPCR分析必须在提取受体后立即进行,随着时间的推移活性会迅速下降。本试剂盒提高了受体的稳定性,为研究人员提供了更大的样品灵活性。

本产品仅适用于科研实验,不可做他用。

 

产品组成:

组分名称

PC013-10T

PC013-100T

Storage

缓冲液A

5×1ml

50 ml

 

2-8

10×萃取剂B

0.5ml

5 ml

2-8

稀释液C

5×1ml

50 ml

 

2-8

还原剂粉末D

6mg

60mg

 

2-8

100×蛋白酶抑制剂E

0.1ml

1ml

2-8   

长期保存于-20

说明书

一份

 

有效期:

2-8保存,12个月有效,100×蛋白酶抑制剂E-20长期保存。

 

操作步骤(仅供参考):

1从不同样品类型中提取膜蛋白植物组织

1. 称取还原剂粉末0.5 mg,加入0.5 ml缓冲液,配置成1 mg/ml还原剂的缓冲液(现配现用)。

2. 将植物组织用液氮研磨成粉末称取粉末1g,加入0.5ml预冷的配置好的缓冲液重悬,并在冰上孵育20 min(期间上下颠倒)

3. 然后加入0.5ml 1×萃取剂(用稀释液将10×萃取剂稀释10倍到1×),上下混匀后在冰上萃取2小时。 (为获得更好的萃取效果,在4°C下持续混匀)

4. 4°C下以16,000×g离心20分钟。小心取出含有稳定蛋白受体的上清液,然后转移到新试管中。

5. 立即进行下游应用或将提取物等分试样储存,以备将来在4°C下使用长达1周或在-20°C下使用长达1个月,使受体功能损失最小。

2从不同样品类型中提取膜蛋白(不含细胞质蛋白)

1. 将植物组织用液氮研磨成粉末1mg粉末,加入1×PBS重悬,4°C下以16,000×g离心20分钟。

2. 去掉上清,沉淀加入0.5ml1 mg/ml还原剂的缓冲液(现配现用,称取还原剂粉末0.5 mg,加入0.5 ml缓冲液,配置而成。),重悬,并在冰上孵育20 min(期间上下颠倒)

3. 然后加入0.5ml 1×萃取剂(用稀释液将10×萃取剂稀释10倍到1×),上下混匀后在冰上萃取2小时。 (为获得更好的萃取效果,在4°C下持续混匀)

4. 4°C下以16,000×g离心20分钟。小心取出含有稳定蛋白受体的上清液,然后转移到新试管中。

5. 立即进行下游应用或将提取物等分试样储存,以备将来在4°C下使用长达1周或在-20°C下使用长达1个月,使受体功能损失最小。

 

排除故障

现象

可能的原因

建议操作

裂解液浓度过低。

组织太老

选取幼嫩组织

研磨不充分

液氮研磨成细粉

称取量不够

按比例称取材料(如果有0.5 g材料,加入0.25ml缓冲液和0.25ml萃取液。

裂解液粘稠

提取缓冲液的体积太低

增加提取缓冲液的体积(将2 ml提取缓冲液用于2g植物材料

受体产量低

细胞膜溶解性差

在加入缓冲液孵育之前,请使用充分研磨,或者加入缓冲液后再用组织匀浆器匀浆。

细胞破碎过于激烈

请勿使用超声进行细胞破碎。改为使用液氮研磨或者Dounce匀浆器。

 

注意事项:

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 本产品仅供科研使用,严禁它用。

 

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