薄层色谱法对饮料中色素的测定

实验目的

掌握薄层色谱法对饮料中色素的测定的方法。

实验原理

薄层色谱法又称薄板层析法。薄层色谱使用涂敷有支持介质硅胶或氧化铝的平板为支撑体，流动相的移动是依靠毛细作用。将试样点在层析板的一端，并将该端浸入作为流动相的溶剂(常称之为展开剂)中，试样点随着溶剂向上移动。由于不同物质在固定相和流动相中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质也随流动相一起运动，并在两相间进行反复多次的分配，这就使得那些分配系数只有微小差别的物质，在移动速度上产生明显的差别，从而使各组分分离。通常用比移值R  来标记和比较各斑点的位置，其定义是溶质移动速度与展开剂(流动相)的移动速度之比：

实验仪器及药品

1柠檬黄样品

2带有色素的饮料芬达（橙味） 

3无水乙醇

4层析缸

5玻璃毛细管(直径约 1 mm)

6 薄层色谱板

实验条件

实验步骤

0.预备：将层析板置于烘箱中，于105℃活化30 min 后，保存于干燥器中备用。洗净展开缸，晾干待用）

1．点样：

   1在离层析板的底端2 cm 处用铅笔轻画一条线，作为原点线，在顶端2 cm 处也同样画一条线，作为前沿线。 

 2用管口平整的毛细管分别吸取少量各色素溶液及饮料，点样

3毛细管垂直地轻轻接触到层析板的原点线上点样，斑点直径约为2～3 mm，间隔约1 cm。

2．层析：

   1在层析缸中加入展开剂约30 mL(在缸中液层约厚1 cm)，盖上层析缸盖。待展开剂蒸气在层析缸内达到饱和(约15  min)

2将点好样的层析板斜搁或近垂直地搁在层析缸中，点有薹样堂一鬻浸于展开剂，点有试样的一端浸于展开剂内。

3. 当展开剂上升到前沿线时，取出层析板，晾干，观察有色斑点。

4. 观察现象，计算比移值R ：  f

实验条件

实验数据与现象

黄色带与柠檬黄样品达到同一高度，另有浅黄色低于该高度。饮料中含有柠檬黄和另一种未知色素。

备注：由于时间关系，未测定比移值

问题与讨论

（1）点样时，原点太大对实验有何影响?

答：展开时会造成各种组分交叉或拖尾。

（2）层析缸中展开剂的液面高度若超过原点线，对薄层色谱分析有什么影响?

答：会使原点到层析点之间距离的数据不精准，比移值偏小。

（3）若样品本身不能显色，可用什么方法确定各组分在薄层色谱板的位置?

答：可以在紫外灯照射下观察。

                                                实验人员：吴婧 宗呈炜 贾斐然

                                                撰稿：贾斐然

                                                参考：生化检测课程材料