T4DNA连接酶是否能连接任意两个平末端？从网友冰凌的博客上看到的问题，来自对新课标教材一道试题答案的思考。

[试题]（课标教材·选修三《现代生物技术专题》P7“思考与探究”的第1题）限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段：

(1) …CTGCA    (2) …AC    (3) GC…

    …G            …TG        CG…

（4） …G      (5)    G…  (6) …GC

      …CTTAA     ACGTC…      …CG

(7) GT…       (8)AATTC…

    CA…              G…

你是否能用DNA连接酶将它们连接起来？

[答案]（《教师教学用书》P11—12）

（2）和（7）能连接形成…ACGT…

                      …TGCA…

（4）和（8）能连接形成…GAATTC…

                      …CTTAAG…

（3）和（6）能连接形成…GCGC…

                      …CGCG…

（1）和（5）能连接形成…CTGCAG…

                      …GACGTC…

[博主意见]DNA连接酶（ligase）的作用是催化DNA片段之间的5'磷酸基和3'羟基之间形成3'5'-磷酸二酯键，主要用于连接两个独立的DNA片段或修复双链DNA中一条链上的切口。目前常用的有E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。T4DNA连接酶既可以连接黏性末端，也可以连接平末端，而E.coliDNA连接酶只能连接黏性末端。

上述两种DNA连接酶对其所连接的DNA两端的碱基序列都没有什么特殊要求。有些限制酶切割DNA后产生平末端，可在T4DNA连接酶作用下直接连接，但连接效率要比黏性末端之间的连接低。不必考虑末端结构，但不同酶作用产生的平头末端互相连接后，就不能用原来的酶再切开。[1]

因此上面这道试题的答案不完整，应该还要加上：

（2）和（3）能连接形成…ACGC…

                      …TGCG…

（6）和（7）能连接形成…GCGT…

                      …CGCA…

2008年江苏高考生物卷也涉及这一问题，该卷第32题第（3）问“图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？      。”答案给的是：“否”。该题的答案是正确的。

参考文献

[1]《新编基础医学问答（生物化学·分子生物学·遗传学·细胞生物学分册）》（主编：崔行，天津科学技术出版社2001年1月第1版）