[例题]限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—^↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。

①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。

②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。

③在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？为什么？

[参考答案]①  ②

http://img.blog.163.com/photo/RE3cUpT8k9SB2PlzRRFO0Q==/2858941338450882607.jpg

③可以连接。因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互补的）。

[网友“人生如梦”质疑]目的基因所在的DNA序列如果是这样：http://img.blog.163.com/photo/H6SHwvZjBR-5QAjpKhNqRw==/882424051988537078.jpg

此时得到的目的基因与质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端是无法进行碱基配对的啊。这种情况为什么又不会出现呢？

[博主解析]众所周知，DNA分子的两条脱氧核苷酸长链是反向平行的，一条链是5’→3’方向，另一条是3’→5’方向。在一般表示DNA分子碱基序列的图中，上边一条链是5’→3’方向，下边一条是3’→5’方向。限制性内切酶的识别序列也是有方向性的，通常写出的限制酶的识别序列是专指5’→3’那条链上的碱基序列。在上面的例题中，限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点就是5’—G↓GATCC—3’，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是5’—↓GATC—3’。所以“人生如梦”画的图中，目的基因所在的DNA序列，只有左边具有一个限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点，右边的那个序列是5’—CTAG—3’，不能被限制性内切酶Ⅱ识别和切割，因此“人生如梦”设想的那种情况不会出现。

附：部分常用的限制性内切酶的识别序列和切点。从表中可以看出，例题中酶Ⅰ是BamHⅠ，酶Ⅱ是Sau3A。

各位如果要深入了解有关情况，请点击下面的链接： 

http://yedaohaifeng.vicp.net/Article/ShowArticle.asp?ArticleID=488