甲基绿(methyl
green)和吡罗红(pyronin,又名派洛宁)两种染色剂分别能与细胞内的DNA、RNA结合呈现不同颜色。当甲基绿与吡罗红作为混合染料时,甲基绿与染色质中DNA选择性结合显示绿色;吡罗红与核仁、细胞质中的RNA选择性结合显示红色。
配制吡罗红甲基绿染色剂需要的试剂及配制方法
1
试剂
吡罗红甲基绿混装粉(如果化学试剂商店没有吡罗红甲基绿混装粉,可以分别购买甲基绿和吡罗红G,然后按A液的第二种方法配制),乙酸钠,乙酸,蒸馏水。
2
染色剂的配制方法
2.1
染色剂A液的两种配制方法
2.1.1 第一种方法
取吡罗红甲基绿粉1g,加入到100mL蒸馏水中溶解,然后用滤纸过滤,将滤液放入棕色瓶中备用。
2.1.2 第二种方法
取甲基绿2g溶于98mL蒸馏水中,取吡罗红G5g溶于95mL蒸馏水中。取6mL甲基绿溶液和2mL吡罗红溶液加入到16mL蒸馏水中,即为A液,放入棕色瓶中备用。(注意:用于核酸染色的是吡罗红G,请不要错买吡罗红B。)
2.2
染色剂B液的配制方法
B液是一种缓冲液,由乙酸钠和乙酸混合而成。先取乙酸钠16.4g,用蒸馏水溶解至1000mL备用;再取乙酸12mL,用蒸馏水稀释至1000mL备用。取配好的乙酸钠溶液30mL和稀释的乙酸20mL,加蒸馏水50mL,配成pH为4.8的B液(缓冲液)。
2.3
染色剂的配制
取A液20mL和B液80mL混合,就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。应该注意的是该试剂应现用现配。
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