1、佩戴眼镜和手套：从液氮罐中取出安或冷冻管。

2、迅速放入38℃水浴中，并不时摇动，在1分钟内使其完全融化。

3、然后再无菌下取出细胞。冻存管用75%酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，在滴加10ml 培养液。

4、在1000r/min速度下离心5-10分钟，弃去上层液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，接种浓度1*10g/l，置37℃温箱静置培养，次日更换一次培养液，继续培养观察生长情况。若细胞密度较高，同时传代。若无需离心直接将细胞加入瓶中，并加入培养基贴壁培养12-24小时后，充去上清，换入新鲜培养基继续培养。加入的培养液的量依冻存的细胞数量，如果冻存数量为106，则稀释10倍使细胞达到105即可。

注意事项：在细胞复苏操作时，应注意融化冻存细胞速度要快，可不时摇动安或冷冻管，使之尽快最易受损的温度段（-5--0℃），这样复苏的冻存细胞存活率高，生长及形态良好。然而，由于冻存的细胞还受其他因素的影响，有时也会有部分细胞死亡。此时，可将不贴壁、漂浮在培养液上的（已经死亡）细胞轻轻倒掉，再补以适量的新培养液，也会获得较为满意的结果。