标签:
其他频道 |
分类: 实验方法 |
细胞染色:台盼蓝
台盼蓝(Trypan Blue,也称Direct blue
14):一种死细胞染色用色素
化学名:
3,3'-{[3,3'-Dimethyl(1,1'-biphenyl)-4,4'-diyl]bis(azo)}bis(5-amino-4-hydroxy-2,7-naphthalenedisulfonic
acid), tetrasodium
salt3,3’-{[3,3’-二甲基-(1,1’-二苯基)-4,4’-二基]双(偶氮)}-双(5-氨基-4-羟基-2,7-萘二磺酸),四钠盐
分子式:C34H24N6Na4O14S4
分子量:960.81
CAS Number: 72-57-1
外观:黑褐色结晶粉末
摩尔吸光度:>69,000(在606nm附近)
染色原理:
细胞损伤或死亡时,台盼蓝可穿透变性的细胞膜,与解体的DNA
结合,使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。严格来说,台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性,
通常认为细胞膜丧失完整性,即可认为细胞已经死亡。这被称为染料排除测试(dye
exclusion),Erythrosin B(红色)、negrosine、eosin
Y、AO和EB也用于此目的。通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞,并可使用细胞计数器进行计数。
溶于水,可以配制成10mg/ml的水溶液,水溶液呈深蓝色。
台盼蓝主要用来鉴定原代培养细胞时,细胞分离后的存活情况,用0.4%台盼蓝直接染色5-10分钟,在显微镜下观察即可。
应用于细胞凋亡:
如果细胞膜不完整、破裂,台盼蓝染料进入细胞,细胞变蓝,即为坏死。如果细胞膜完整,细胞不为台盼蓝染色,则为正常细胞或凋亡细胞。尽管在凋亡的早期到中期检测是很困难的,此方法对反映细胞膜的完整性,区别坏死细胞有一定的帮助。
储存条件:常温保存
注意事项:
1. 台盼蓝对人体有毒
2.
台盼蓝染细胞时,时间不宜过长。否则,部分活细胞也会着色,会干扰计数。
3.
台盼蓝染色法对于悬浮细胞来说,还比较方便,对贴壁细胞来说,较为繁琐。因为要消化,有时,96孔板不一定能消化干净。而且,该法是测定细胞浓度的方法,与细胞悬液的体积有关,加入的胰蛋白酶或1640要计入终体积。可以说,该法相对准确,可能有一些人为因素的干扰。