加载中…FITC（异硫氰酸荧光素）
(2012-03-13 23:58:44)
标签：
fitc异硫氰酸荧光素杂谈 |
分类： 科学仪器 |
FITC（异硫氰酸荧光素）
基本信息
异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC) 纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。有两种异构体，其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性与蛋白质结合力等方面都更优良。FITC分子量为389.4，最大吸收光波长为490～495nm，最大发射光波长为525～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。FITC在冷暗干燥处可保存多年，是目前应用最广泛的荧光素。其主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。 FITC 是在荧光素的基础上通过化学反应增加硫氰酸基团得到的，硫氰酸基团可以和生物活性物质例如蛋白质上的伯胺基团反应形成硫脲键，从而实现对生物活性物质的荧光标记
FITC相关事项
分子式：C21H11NO5S 分子量：389.38 性质： 1. 外观：黄色粉末 2. 纯度：≥95% （HPLC） 3. 产品描述：FITC能和各种抗体蛋白结合，结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性，并在碱性溶液中具有强烈的黄绿色荧光。通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测。用于医学，农学和畜牧等方面，可对由细菌病毒和寄生虫等所致疾病进行快速诊断。 4. FITC标记抗体流程： （1）将待交联的蛋白（浓度≥1mg/ml）对交联反应液透析三次4℃，至pH=9.0。交联反应液配制方法：7.56g NaHCO3，1.06g Na2CO3，7.36g NaCl，加水定容至1 L。 （2）将FITC溶于DMSO中，浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制，避光。 （3）按P:F（蛋白质:FITC）=1mg:150μg 的比例将FITC缓慢加入于抗体溶液中，边加边轻轻晃动使其与抗体混合均匀，暗处4 ℃反应8 h。 （4）加入5mol/L的NH4Cl至终浓度50mmol/L， 4 ℃终止反应2 h。 （5）将交联物在PBS中透析四次以上，至透析液清亮。 （6）交联物的鉴定 蛋白浓度（mg/mL） = [ A280– 0.31×A495 ] / 1.4 F/P比例: 3.1×A495 / [A280 – 0.31×A495 ]，该值应介于2.5 ~ 6.5之间。 （7）FITC交联的蛋白应置于pH 7.4的磷酸盐缓冲液中，加入0.1% NaN3、1% BSA，4℃避光保存。 储存条件：4℃避光保存
喜欢
0
赠金笔