细胞增殖实验（MTT法）

    按每孔200μL培养液将处于对数生长期的第三代MSCs接种于96孔板，每孔细胞接种量为2×10³个（细胞浓度约为1×10⁴/mL）。至接种24h细胞贴壁黏附后，吸弃原培养液，依次加入等体积条件培养液，含雷奈酸锶终浓度分别为0 mmol/L、0.05 mmol/L、0.1 mmol/L、0.5 mmol/L、1 mmol/L、5 mmol/L，对应记作0 mM SR、0.05 mM SR、0.1 mM SR、0.5 mM SR、1 mM SR、5 mM SR。每孔4个复孔重复，另以未加入细胞只含基础培养基孔为空白对照组，置于37℃5％CO₂培养箱内，分别培养24h、48 h和72h。检测时，各孔加入20μL MTT溶液（5 mg/mL），37℃孵育4h，出现紫色针状结晶，弃去上清后每孔加入100 μL DMSO ，置于37℃恒温摇床上振荡20 min。待细胞表面吸附的紫色结晶溶解完全，以空白对照孔OD值调零，用酶标仪在波长490nm处读取OD值。根据下面公式计算细胞增殖率：（OD_treated／OD_blank —1）×100％。

细胞增殖实验（alamarBlue法）

取P3大鼠骨髓间充质干细胞，按每孔细胞接种量为2×10³个（细胞浓度约为1×10⁴/mL）接种于96孔板，每孔加入10% alamarBlue试剂，再加入不同材料的浸提液使每孔终体积至200μL。实验分组同上，每组复5孔。检测细胞增殖活性的时间点包括12h、24h、48h、72h、96h，至取样时间点每孔取100μL上清，用酶标仪在570nm和600nm之间连续读取OD值。读数后需将上清放回对应孔内继续进行连续培养，至下一个测定点重复上述操作。按照下面公式计算alamarBlue还原量，代表细胞相对增殖活性。

CRED Test Well

% Reduced =                                                

COX Negative Control Well

           (εOX)λ2 Aλ1 - (εOX)λ1 Aλ2 of test agent dilution

=

(εOX)λ2 A’λ1 - (εOX)λ1 A’λ2 of untreated positive growth control

C_RED =alamarBlue® (RED)还原形式

C_OX = alamarBlue® (BLUE)氧化形式

ε_OX = 氧化形式alamarBlue (BLUE) 摩尔消光系数

ε_RED = 还原形式alamarBlue (RED) 摩尔消光系数

ε_{OX 570}= 80586

ε_{OX 600}= 34798

ε_{RED 570}= 155677

ε_{RED 600}= 5494

A =实验组吸光值

A’ =空白对照组吸光值（阴性对照组只含有基础培养基和alamarBlue并不含细胞）

λ1 = 570nm

λ2 = 600nm