质粒的转化是指将质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。将连接产物转化到感受态细胞中，实现重组克隆的增殖，便于后续分子操作。可以采用多种方法筛选和鉴定目的克隆。
 
实验目的：掌握热激法或电转化法转化大肠杆菌感受态细胞及转化子的鉴定方法。
实验材料：外源片段与载体的连接产物；大肠杆菌感受态细胞。

实验原理：
（1）热激法：大肠杆菌在0℃ CaCl2低 渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基－钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA 复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖。在被转化的细胞中，重组子基因得到表达，在选择性培养基平板上可挑选所需的转化子。
（2）电转化法：外加于细胞膜上的电场造成细胞膜的不稳定，形成电穿孔，不仅有利于离子和水进入细菌细胞，也有利于孔DNA等大分子进入。同时DNA在电场中形成的极性对于它运输进细胞也是非常重要的。

热激法转化实验步骤：
1．制备选择性培养基平板：在融化的250ml LA培养基中250 ml Amp（100mg/ml），250 ml X-gal (20mg/ml)，25 ml IPTG (200mg/ml)，混匀后倒入灭菌培养皿中；
2．取出3管制备好的感受态细胞，放在冰上融化；
3．每100 ml感受态细胞加入约20ng质粒DNA，3管分别加连接产物、标准超螺旋质粒DNA（阳性对照）及不加入任何DNA（阴性对照），用移液器轻轻吸打均匀，在冰上放置30分钟；
4．热击：将离心管放置42℃水浴，热击90秒，注意：勿摇动离心管；
5．冰镇：快速将离心管转移至冰浴，放置1－2分钟；
6．复苏：每管加400 ml SOC培养基，在37℃摇床温和摇动温育45分钟，使细菌复苏；
7．布皿：取适当体积均匀涂布于含有IPTG、X-gal、抗生素（Amp）的LA平板；
8．培养：倒置培养皿，于37℃培养12－16小时 即可观察到蓝白相间的菌落（其中白色菌落为含有外源插入片段的转化子，蓝色菌落是载体自连的转化子）

质粒电转化大肠杆菌感受态细胞操作步骤
1．制备选择性培养基平板：在融化的250ml LA培养基中250 ml Amp（100mg/ml），250 ml X-gal (20mg/ml)，25 ml IPTG (200mg/ml)，混匀后倒入灭菌培养皿中；
2．取出制备好的感受态细胞，放在冰上融化；
3．每管感受态细胞加入1ml连接产物，用移液器轻轻吸打均匀，置冰上；
4．电转化仪选择1800V作为输出电压；

5.将要转化的混合物加入预冷的1mm的电转化杯中，立即按下按钮电击；

6.立即加1mlSOC培养基到转化杯中重悬细胞；

7.将细胞转入合适的培养管中37 ℃培养1小时；

8.吸取合适体积的菌液涂布已倒好的选择培养基平板；

9.37 ℃培养过夜，观察结果。

附注：
1. 利用氨苄青霉素抗性筛选转化子时，用转化细胞铺平板的密度要低（90mm平板上不得超过105个菌落），同时37℃培养不应超过20小时，具氨苄青霉素抗 性的转化体可将b－内酰胺酶分泌到培养基中，迅速灭活菌落周围的抗生素，从而导致对氨苄青霉素敏感的卫星菌落的出现。
2.鉴定转化子中是否含有外源DNA片段常用的方法有：
1)a互补；
2)杂交筛选；
3)插入失活（一些老质粒如pBR322等）;
4)小量提取质粒酶切检测、PCR检测