【目的】：

便于在体外对机体各种免疫细胞．分别作鉴定，计数或功能测定。

淋巴细胞分离以后可以做淋巴细胞抗原片制备，E花环试验，淋巴细胞转化试验，淋巴细胞培养（需无菌操作）。

【原理】

人 淋巴细胞的方便来源是外周血，分离的原则是收率较高，纯度较好，失活较低，根据不同试验有相对纯度，无论采用哪种方法，应尽最大可能保持细胞应有活性。分 离的技术可根据细胞的物理性状和表面标志设计，根据不同实验目的可采用密度梯度离心法、吸附分离法和其它特殊分离法。此次实验采用的1就是密度梯度离心法。其原理是：人外周血中各种细胞的密度不同，人红细胞密度为1.093，粒细胞为1.092，淋巴细胞为1.074±0.001。密度梯度离心法的原理主要根据各类血细胞比重的差异，利用比重介于某两类细胞之间的细胞分离液对血液离心，使一定比重的血细胞依相应的密度梯度分布于不同的独立带，从而达到分离的目的。

【材料】

1、肝素抗凝管，普通管（负压），采血针，血清收集管

2、淋巴细胞分离液(，比重1.077±0.001）。

3、无Ca++、Mg++、Hank's 液

4、刻度吸管、毛细吸管、离心管、离心机等。

5置于冰箱的冷丙酮（固定细胞，保持细胞的完整性）

【方法】

备注：如做淋巴细胞转化或其它培养，所用试剂、器材应是无菌的。Hank's 液为缓冲等渗液，类似营养液，保持细胞活性及完整性，可抵抗轻微的酸碱变化。

离心示意图如下

【重点】

掌握淋巴细胞分离的原则和方法，能成功分离淋巴细胞，使用离心机时必须配平，并注意安全。

【难点】

1．将抗凝血与Hank's 液的混合液加入淋巴细胞分离液时，必须保持两种液体界面清晰。

2．用毛细吸管吸取淋巴细胞层时，要掌握好力度，在细胞层上作各个方向的吸取，勿吸到其它层的液体或细胞，吸取时勿使各层细胞相混，