NO由于是自由基，化学性质活跃，半衰期短，故检测较困难。目前有物理和化学两类方法：

1、电子自旋共振（ESR）法 属物理方法，将自旋捕集剂（如MNP、DBNBS）加入反应体系中，与反应体系中NO自由基结合形成较稳定的自旋加合物（寿命较长的自由基），后者在外加磁场作用下，未配对的电子能级产生分裂，当外加电磁波能量与电子分裂的能级差相等时，未配对的电子发生跳跃，在电子顺磁共振仪上出现ESR信号，信号强度与NO含量成正比。这种方法可以直接检测组织或细胞中NO含量，特异性强、但灵敏度较低（10^-6mol/L，）线性范围也较窄（10^-5、10^-6mol/L），且仪器昂贵，临床应用较少^[70]。

2、电化学方法 此方法可直接检测机体任何部位和活体标本的NO。有两种方法：①Clark电极法是利用NO易被氧化的特性，使其在电极表面氧化形成电流，可用电流表测出。在体外NO浓度在1-3×10^-6mol/L范围内，电流与NO浓度呈线性比例关系。此法可检测局部组织产生的NO，灵敏度高（10^-9mol/L），反应迅速（数秒钟），但易受氧分子的干扰，测量电流寿命较短（约半年）需定期更换，故采用不多^[71]。②聚合卟啉微感器法：是将卟啉化合物沉积在玻片上，卟啉环内结合有金属离子N：（II），NO与该环中的Ni（II）配位，引起膜电位改变，从而测得NO含量。该法检测NO阈值可达10^-20mol/L，线性反应浓度高达3×10^-4mol/L，线性反应浓度高达3×10^-4mol/L，特异性较高，可测定单个细胞释放的NO量，最适合检测NO释放动力学^[72]。

3、cGMP检测法 NO产生后能很快弥散到临近细胞，激活细胞内鸟甘酸环化酶，生成cGMP。因此可用放射免疫技术（RIA）测定cGMP含量，可间接反应组织细胞NO的生成量。此法较为敏感，所需费用少，适合大批量样本的测定。但需排除缓激肽、PGI₂、心钠素等的影响^[70]。

4、瓜氨酸含量测定 在NADPH存在的条件下lmolL-Arg在NOS的催化下生成NO的同时，产生lmol的瓜氨酸。应用液体闪炼计数仪测定同位素（³H或¹⁴C）标记的L-Arg生成同位素标记的瓜氨酸的量，可代表NOS活性。因为NOS可根据是否具有Ca²⁺依赖性，分为原生理和诱导型，通过调整反应液的成分，此法可分别测出iNOS和cNOS的活性。测定的最低限为5×10^-11mol/min/g组织^[70]。本法可用于分析细胞或提取物中的NOS活性。敏感性和特异性均很高，但应注意反应条件和分离过程的标准化，以尽量避免外界诸多因素的干扰。

5、NO^-₂/NO₃^-含量规定

（1）镉还原法 NO氧化生成硝酸盐和亚硝酸盐。生物标本中NO^-₂/NO₃^-含量可作为NO生成的指标。PH9.2-10之间，生物样本通过镉柱时NO₃^-还原为NO^-₂，NO与Griess试剂[1%对氨基苯磺酰胺，0.1%N-（1-奈基）-乙二胺，5%H₃PO₄]反应生成粉红色化合物。利用分光光度计在540mm波长检测其吸光度大小，吸光度大小与反应体系中NO^-₂/NO₃^-含量成正比^[70]。此法简便易行，但要注意仅检测生物标本中的NO^-₂成分，不能完全反映样本中NO含量，若将生物样本经过镉还行后再测定NO含量，其结果会更准确。本法敏感度为1-2×10^-6mol/L，线性范围可达硝酸盐浓度至2.5×10^-4mol/L，为临床实验室常用方法。

（2）硝酸还原酶法 采用硝酸还原酶可特异性地将NO₃^-还原为NO^-₂，NO^-₂与Griess试剂发生重氮反应生成粉红色化合物，然后同上法测定样本中NO^-₂/NO₃^-含量^[73]。此法重复性好，NO^-₂/NO₃^-线性范围至2×10^-4mol/L，为临床实验室常用方法。

6、化学发光法 生物样本中加入酸使其酸化或/和加入还原剂可使其中的亚硝酸盐、硝基或亚硝基类物质还原释放NO，NO与臭氧反应生成NO₂的同时，释放光子（NO+O₃→NO₂+O₂+hv），测定光子的量，可代表标本NO的含量。此法可以用NO分析仪测定。本法测定NO的范围为3×10^-10-3.5×10^-10mol/L。但易受外界条件（如氨）的影响，测得的NO含量并不能完全代表组织细胞的实际NO含量。Li根据NO能够与HO反应形成过氧化亚硝酸盐，后者作为强氧化剂能够氧化鲁米那（luminol）,产生化发光的原理，建立1种新型化学发光测定NO体系，可用于全血标本的NO定量。此法目前被认为是NO定量测定的金标准。

除上述以外，还有形态学法方法、血红蛋白测定法临床应用较少，这里不一一介绍。另外，至今为止，已有多种生物NOS分子被克隆成功。根据NOS核苷酸序列设计PGR扩增引起或核酸探针，从而可利用原位杂交、PCR技术、Northem印迹技术检测NOSmRNA表达，特异性最高，但技术复杂，费用昂贵，目前主要用于实验室研究。