Agilent 1260——仪器硬件总结

1.      本实验室Agilent HPLC 1260系统：

溶剂柜→脱气机+泵（G1311C）→自动进样器（G1329B）→柱温箱（G1316A）→检测器（DAD：G4212B、FLD：G1321B）

色谱柱：C18 5μm 150×4.6mm

2.      堆积方式：流路自上而下，减小死体积和延迟体积

溶剂柜→脱气机→泵→自动进样器→柱温箱→检测器

3.      死时间：完全不被保留，通过系统所需的时间：进样器→检测器的流动池

死体积导致峰变宽、分离度低

延迟体积：梯度混合点→色谱柱头，之间的管道体积

影响梯度的精度，进而影响分析的灵敏度，同时使运行时间周期延长

4.      管线接头长短不一致，不可混用：

小内经→大内径 死体积变大；反之，压力增大

接头过长，则接不上或泄露；过短，则死体积增大

5.      真空脱气机：半透管（膜）材料，气体分子可过，液体不行

可以降低噪音、保证保留时间的重现性

 

四元泵低压下混合溶剂，配置内嵌式真空脱气机，各通道内部体积1.5ml

 

正常状态：声音忽大忽小

 

氧气对荧光检测器影响大：导致淬灭

 

长期不用：管路中甲醇/乙腈，防止长菌，影响半透膜效果

 

6.      四元泵G1311C：压力上限400bar，流量范围：0.2-10ml/min

溶剂瓶→真空室→四元比例阀→泵（入口单向阀→出口单向阀→阻尼器→冲洗阀→废液/进样口）

四元泵无缓冲压力毛细管，会造成延迟体积变大，其压力波动大于二元泵；二元泵有400μl静态混合器。

溶剂传输系统：串联柱塞泵，主泵腔=2*副泵腔。

 

泵头的活塞杆为单晶蓝宝石，不能超声清洗：水洗，溶剂擦洗。

单向阀（宝石球+弹簧）：单一方向流动，阀数量增多，泄露几率变大，增加维护难度。不可超声。

脉冲阻尼器：减小泵在运动中产生的压力脉冲；测量泵压。

 

阀堵塞：缓冲盐易造成堵塞(四元比例阀下方通道进)，堵塞则用热水冲洗。

乙腈：易形成二聚体，不用纯乙腈保存系统，红宝石球会催化二聚体的形成。

也最好不要用纯甲醇保存柱子，不然会挥发，干掉。

 

 

 

 

泵的保养

1) 用高质量试剂和HPLC级溶剂；

2）过滤流动相和溶剂；

3）脱气；

4）每天开始使用时放空排气，工作结束后从泵中洗去缓冲液；

5）不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中；

6）定期更换垫圈；

7）需要时加润滑油。

处于良好操作状态的泵，应该能使色谱图上的基线平稳；保留时间的重复性好。在等度洗脱时压力波动小于2%。梯度洗脱时压力变化应是缓慢和平稳的。

泵的检查

在泵运行过程中将溶剂吸滤头从流动相中拿出，放进一小段气泡进入溶剂管路，进行观察。

1) 气泡的运行状态为一走一停，该状态为正常；

2) 气泡的运行状态为一走一停一退，入口单向阀受到污染，单向效果不好，有部分回流，建议清洗滤芯；

3) 气泡的运行状态为一走一退，入口单向阀失效，无单向作用，需要确认滤芯或电磁阀哪一部分有问题；建议进行清洗或更换操作；

 单向阀的超声：A. 将单向阀用5％－6％硝酸溶液超声15分钟。B. 取出后换用纯水（色谱级别）超生15分钟，C. 取出后换用甲醇超生15分钟。超声?

装好单向阀，检查有无漏液之处。

装好后应该先用大针筒在流动相排出口的最末端抽液，目的是让整个色谱系统充满流动相，然后才可以运行色谱泵，不然刚装好泵能有空气，很伤泵。

http://blog.sina.com.cn/s/blog_559221280100dqti.html

 

7.      进样器：六通阀原理

充样：进样针→定量环→废液，泵→色谱柱

进样：泵→定量环→色谱柱，进样针→废液

 

手动

进样针：液相专用的平头针。

进样量：要么小于定量环体积的一半，要么满刻度进样（3~5倍定量环体积）

废液口：废液管出口末端与进样口水平

 

自动

标准进样体积：0.1-100μl，多次吸样可扩展至1.8ml

精度：5-100μl RSD<0.25%；1-5μl RSD<1.0%

残留：洗针<0.05%；不洗针 <0.1%

延迟体积：主路状态300μl+进样体积；旁路状态 6.2μl

 

进样过程

六通阀切至旁路→计量泵活塞杆回归零位→抬起进样针→样品抓至针座→针扎入样品瓶→计量泵抽取样品→拔出针→样品瓶离座→针扎入针座毛细管→六通阀切至主路→样品瓶放回样品盘

主路：泵→计量泵→定量环→针座毛细管→色谱柱

旁路：泵→色谱柱

针抽完样品扎入针座的瞬间，进样阀同时切换位置，将样品送入系统。

 

针尖取样位置：-2.5mm~35mm之间设置。

针座毛细管体积：2.3μl

 

特殊功能

洗针：针的外侧，即在某溶剂中蘸一下而已。洗针瓶有盖无垫。

多次吸液：当进样量>100μl时采用，最大1.8ml。

程序进样：样品自动衍生化。

 

8.      柱温箱

温度稳定性：±0.15℃

内部死体积小（左侧3μl，右侧6μl）

温度范围10~80℃

可选用色谱柱切换阀：色谱柱识别系统（卡套、加热块上的传感器）

 

G1316C：利用半导体控温，溶剂先在柱温箱管路中预热，再进入柱子（保证稳定性和重复性）；采用柱后冷却流动相（保持流动相温度与检测器温度一致，保证很好的信噪比）

 

9.      检测器

氘灯的使用：打开后需预热（新灯~十几分钟，寿命长的适当延长）；不能频繁开关氘灯，寿命约2000h，灯能量测试判断是否更换（表现为噪声大、灵敏度不够），不建议提前购买氘灯作为储备消耗品。

 

DAD：G4212B（采集频率80Hz，狭缝宽度4nm，最大波长640nm）

卡套式流通池（光程10/60mm，体积1.0/4.0μl）：若需要提高灵敏度，使用光程60mm的，可降低检测限，提高检测器的性能。但死体积大、展宽。

 

光学狭缝：越小，光谱分辨率越高，色谱的灵敏度越低，信噪比越低。

默认值为4nm。

 

10.  实验室应备用耗材：

泵头密封垫（易损坏）：泵漏液时需成对更换，反相与正相体系不同。反相体系：更换泵头密封垫后，采用异丙醇，高压下冲洗泵，赶走气体（非必须步骤，若压力波动的话需要）。正相体系不能做这样的磨合。

泵相关配件：密封、单向阀（入口与出口）、泵头装置、各式接头、保险丝等部件，以及更换工具。

5~10个PTFE过滤芯（冲洗阀）：水做溶剂，流速为5ml/min，压力大于10bar则需更换。