四妙勇安汤对人脐静脉血管内皮细胞ECV304的增殖作用
(2010-06-26 20:37:51)
缺血性疾患(如晚期冠状动脉病变、糖尿病足)严重威胁着人类健康，也成为我国病死率和病残率不断上升的主要原因。Hockel等[1]认针对缺血性疾病的治疗提出了“治疗性血管生成”的概念。此概念提出后被应用于缺血性疾病的治疗中。在血管形成过程有许多关键步骤，包括内皮细胞活化、增殖、迁移、中空的管腔形成等[2]。不难看出，血管内皮细胞的增殖是血管管腔——这一实体形成的结构基础。四妙勇安汤是一首具有清热解毒、活血通络功效、治疗脱疽的古方，既往研究发现此方对心血管系统疾病疗效肯定[3]，为进一步为其临床应用提供实验依据，本研究观察了四妙勇安汤对人脐静脉内皮细胞ECV304增殖作用的影响。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
DMEM/F12干粉(Gibco公司，12400024)，胎牛血清(FBS，中美合资兰州民海生物工程有限公司， A911001.
104)，10000U/mL青霉素、10000μg/mL链霉素(Hyclone公司，SV30010)，胰蛋白酶(Gibco公司，
27250018)， BrdU试剂盒(BoehringerMannheim公司， 11647229001)，
EVC304细胞株(由天津市神经外科研究所张文治教授惠赠)。
1.2 含四妙勇安汤人血清的制备
金银花、玄参、当归、甘草，共11剂，按原方准确称取每味中药，加入15倍量的去离子水(即1g药加15mL去离子水)煎煮1.
5h，冷却，滤出药渣，将四妙勇安汤水煎液以常规量，给健康志愿者连续服用5天，开始每日1次，连续服用3天后，于采集血液前30、24、18、12、6、3、1.
5、0. 5h连续8次间断服药，共计11次，静脉采血，以3000r/min离心15min，取上层血清，以0.
22μm微孔滤膜过滤，制成人含药血清(HDS)备用，同时采集志愿者未服药时的血液制作对照组用血清(HNS)，以上血清均56℃水浴灭活30min后使用。
1.3 ECV304细胞的复苏及传代培养
将液氮中冻存的ECV304细胞株取出，迅速置于40℃水中，溶解后加D
-hank’s中，离心，去上清液，加入含10％胎牛血清(FBS)及1％双抗的DMEM /F12培养基中培养，置于5％
CO2、37℃饱和湿度孵箱培养，长成80％融合状态时即可传代。传代时，弃去原培养液，加入0. 25％胰蛋白酶溶液和0. 02％
EDTA的1∶1混合液约5mL，消化1min。加入新鲜含10％胎牛血清的DMEM /F12培养液终止消化反应。调整成密度约1.
5×105个/mL的细胞悬液，转入新的培养瓶中。实验分为：对照组(FBS组)：含10％ FBS的DMEM
/F12培养液。空白血清对照组(HNS组)：含10％健康人血清的DMEM
/F12培养液。四妙勇安汤含药血清组(HDS组)：含10％的四妙勇安汤血清的DMEM /F12培养液。
喜欢
0
赠金笔
加载中，请稍候......
加载中…
喜欢