今天对罗丹明B、罗丹明B标记的胶束、罗丹明B和脾组织匀浆的混合液进行荧光光谱扫描，遇到了一些问题和奇怪的现象。
  第一步确定发射波长，我用230、250分别作为激发波长进行发射光谱扫描，来寻找波长不变的发射峰，设定范围为280-600nm，得到的光谱图均有两个峰，在扫描罗丹明B和胶束时第一个峰在352-362范围内有波动，第二个峰始终在582nm，显然第二个峰就是发射峰，但第一个峰的峰高要远远高于发射峰。第一个峰离激发波长处甚远，又如此之强，应该不是拉曼散射峰；也不在激发波长的整倍数处，也不会是倍频峰或瑞利散射峰。
  而更奇怪的是在扫描罗丹明B和脾组织匀浆的混合液的发射光谱时，这个峰的位置开始稳定下来，当EX依次为230、250、260、270、280时，发射光谱上均会出现326nm处的强峰和582nm处的弱峰。如果不事先知道罗丹明B的发射波长在580，难免会被混淆视听。
  这个究竟是什么峰？
  而确定了发射波长为582之后，回过头来再扫激发光谱，却出现了一个问题，如何确定激发光谱扫描范围？
  按理只要小于发射波长即可，比如发射波长为582，激发光谱扫描范围可设定为280-581，但事实上根本不可能。你会根本找不到峰，581处绝对是最大值。按经验必须至少相隔30nm以上，但对于激发和发射波长相距较近的荧光物质来说，无法这样设置。
     当我扫描罗丹明B时，
  当我设EM为582时，激发光谱范围为540-558，相距24nm，结果558为最大值；
  当我设EM为582时，激发光谱范围为540-556，相距26nm，结果556为最大值；
  当我设EM为582时，激发光谱范围为540-554，相距28nm，结果554为最大值。
  而罗丹明B的参考激发波长为555，让人抓狂。
  当我设EM为584时，激发光谱范围为540-558，相距26nm，结果556为最大值，得到峰值；
  当我设EM为586时，激发光谱范围为540-558，相距28nm，结果556为最大值；仍得到一致的峰值。
     结论似乎是必须把原先得到的EM值往后推2nm，否则真是没招了。
  当我扫描罗丹明B标记的胶束溶液时，原先得到的EM为590。
  当我设EM为590时，激发光谱范围为546-564，相距26nm，结果564为最大值；只好后推2nm。
  当我设EM为592时，激发光谱范围为546-564，相距28nm，结果562为最大值；
  当我设EM为592时，激发光谱范围为546-566，相距26nm，结果562为最大值；
  当我设EM为592时，激发光谱范围为546-568，相距24nm，结果568为最大值；
  当我设EM为592时，激发光谱范围为546-570，相距22nm，结果570为最大值；
  当我设EM为594时，激发光谱范围为546-564，相距26nm，结果562为最大值；
  当我设EM为598时，激发光谱范围为546-568，相距30nm，结果562为最大值。
      还是非得往后推2nm，光相距26nm也没用，晕死我了！