1、细胞培养经典的ｐＨ值范围是7 2～7 4,可略微偏酸,但不能低于6 8。我们观察293细胞明显适应酸性环境,ｐＨ值在6 2～6 3仍能正常生长及繁殖,尤其是在复苏细胞时。若ｐＨ值超过7 4,则细胞难于贴壁,而ｐＨ值在6 9～7 1时,可顺利贴壁生长,故建议培养293细胞时将ｐＨ值调定在此范围内。2、细胞消化　293细胞的一个生长特性是细胞间易聚集成团。若消化不彻底,则细胞在贴壁生长前即互相粘着成团,细胞易老化且在瓶底分布不均匀。我们的经验是用0 02%ＥＤＴＡ和0 1%胰酶顺次消化,即先加ＥＤＴＡ1ｍｌ至50或100ｍｌ培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去,再加0 1%胰酶1ｍｌ,轻摇使之接触所有细胞后,弃去,将培养瓶置温箱中3～5ｍｉｎ,镜下观察细胞变圆,就可终止消化。3、复苏　293细胞的另一生长特性是贴壁所需时间长且贴壁不牢。细胞冷冻后复苏时,都有不同程度的肿胀,若以50ｍｌ培养瓶待细胞长满瓶底的70%～80%时消化冻存,复苏时将其全部接种至50ｍｌ培养瓶中,易造成细胞的拥挤和层叠,使细胞更难贴壁和生长。我们在293细胞复苏时,多次发现上述因细胞过密而不贴壁,进而死亡的情况。而接种至2个50ｍｌ瓶中时,未出现上述情况。另外,293细胞复苏接种后24小时内,应尽量减少观察细胞次数或不作观察,以免因晃动而影响细胞贴壁。我们观察,293细胞对更换培养基非常敏感,加入新鲜培养基后立即观察,可见细胞触角回缩,部分细胞变圆,易浮起,可能因受冷刺激或ｐＨ值改变,故我们认为复苏后48小时进行首次更换培养基比较合适,且用一次性塑料培养瓶可增加细胞贴壁牢度。换液前宜将培养基预热。