1、PCR产物自身原因：

往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多，而造成PCR的非特异性产物过多。

对策：①减少Taq酶的量，或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③适当降低Mg2+浓度。④增加模板量，减少引物的用量，减少循环次数，提高退火温度。

2、电泳体系的问题：

（1）电泳缓冲液TAE或者TBE的污染，建议更换缓冲液。（2）上样时样品漂了，建议增加上样缓冲液的用量，以及小心加样。（3）电压太高。（4）适当把你的胶的浓度加大。（根据你的片断大小而定）（5）观察你的marker是否也存在拖尾现象，作为对照。

PCR拖尾及假阳性的原因及对策

拖尾

　　现象：产物在凝胶上呈Smear状态。

　　原因：

　　1.模板不纯

　　2.Buffer不合适

　　3.退火温度偏低

　　4.酶量过多

　　5.dNTP、Mg2+浓度偏高

　　6.循环次数过多

　　对策：

　　1.纯化模板

　　2.更换Buffer

　　3.适当提高退火温度

　　4.适量用酶

　　5.适当降低dNTP和镁离子的浓度

　　6.减少循环次数

　　假阳性

　　现象：空白对照出现目的扩增产物

　　原因：

　　靶序列或扩增产物

　　的交*污染

　　对策：

　　1.操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外；

　　2.除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管

　　及加样枪头等均应一次性使用。

　　3.各种试剂最好先进行分装，然后低温贮存