蒽酮比色法测糖

一　目的　掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法

二　原理　蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。

本法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。　

三　实验器材及试剂

马铃薯干粉

可调试移液器或移液管

可见分光光度计（723型）

电子分析天平

水浴锅

电炉子

蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到80%H₂SO₄中，以80%H₂SO₄定容到1000ml，当日配制使用。　　　

标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml备用。

四、操作

1.制作标准曲线　

取7支干燥洁净的试管，按表1顺序加入试剂，进行测定。以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度（mg/ml）为横坐标作图得标准曲线。

表1 蒽酮比色法定糖——标准曲线的制作

单位：ml  

2.样品含量的测定　　　

样品液的制作：

精确称取马铃薯干粉0.1g置于锥形瓶中—→加入30ml沸水—→沸水浴30min（不时摇动）—→取出，3000rpm离心10min（或过滤）—→反复洗涤残渣2次—→合并滤液—→冷却至室温—→定容到50ml的锥形瓶中—→再从中取出1ml，再定容到10ml的容量瓶中

样品液的测定：

（1）取4支试管，按照表2加样（加蒽酮时需要冰水浴5min冷却）

表2  蒽酮比色法定糖——样品的测定

单位：ml     

（2）加样冷却完成后置沸水中煮沸10min，取出流水冷却放置10min，620nm处比色测量各管OD值。

（3）以1号试管作为调零管，2、3、4号管的OD值取平均后从标准曲线上查出样品液相应的含糖量。

3．结果计算：

                                           C×V

                                w  = ————×100%

                                              m_，

式中w：糖的质量分数（%）

C：从标准曲线中查出的糖质量分数（mg/ml）

V：样品稀释后的体积（ml）

m：样品的质量（ml）