营养琼脂培养基的成分组成与主要特点及制备方法！

营养琼脂培养基（Nutrient Agar，NA）是微生物学实验室中最常用的基础培养基之一，主要用于细菌的分离、培养、计数和保存，尤其适用于营养要求不高的需氧或兼性厌氧细菌（如大肠杆菌、葡萄球菌、枯草杆菌等）。

一、成分组成（典型配方）

营养琼脂的成分简单，主要提供细菌生长所需的碳源、氮源、维生素和矿物质，配方如下（每升）：

蛋白胨：5g（提供氮源、氨基酸和维生素）

牛肉膏：3g（提供碳源、维生素和矿物质）

氯化钠（NaCl）：5g（维持渗透压）

琼脂：15g（凝固剂，不提供营养）

蒸馏水：1000mL（溶剂）

pH 值：调至 7.2±0.2（适合多数细菌生长）

二、主要特点

通用性强：成分简单，营养中等，能满足大多数非苛养菌（营养要求不高的细菌）的生长需求，是细菌培养的“基础款”。

物理状态：加入琼脂后呈固体状态（常温下凝固），便于细菌形成单个菌落，用于分离纯化或计数。

用途广泛：可直接使用，也可作为基础培养基添加其他成分（如血液、糖、抗生素等）制成特殊培养基（如血琼脂、选择培养基）。

三、制备方法

按配方称取各成分，加入蒸馏水中，加热搅拌至完全溶解。

调整 pH 至 7.2±0.2（可通过盐酸或氢氧化钠调节）。

分装到锥形瓶或试管中，121高压蒸汽灭菌 20 分钟（杀灭杂菌，同时使琼脂彻底融化）。

灭菌后冷却至 50-60（避免温度过高杀死接种的细菌），可直接倾倒平板（制成平皿）或分装试管（制成斜面），凝固后备用。

四、主要用途

细菌分离与纯化：将含菌样本（如土壤、水、分泌物）接种到营养琼脂平板，通过划线法获得单个菌落，用于纯培养。

菌落计数：对水样、食品等样本进行梯度稀释后接种，计数菌落数（CFU/g 或 CFU/mL），估算活菌数量。

细菌保存：将纯培养的细菌接种到营养琼脂斜面，培养后 4冷藏，可短期保存菌种（一般 1-3 个月）。

基础培养基改造：例如：

加入 5%-10% 脱纤维羊血，制成血琼脂培养基（用于培养链球菌、肺炎克雷伯菌等，观察溶血现象）；

加入特定抗生素（如青霉素），制成选择培养基（筛选耐药菌）。

五、局限性

无法培养苛养菌（营养要求高的细菌）：如流感嗜血杆菌（需要 X、V 因子）、脑膜炎奈瑟菌（需要巧克力琼脂）等，在营养琼脂上不生长或生长不良。

不适用于厌氧菌和真菌：营养琼脂为有氧环境，厌氧菌需在厌氧条件下培养；真菌（如酵母菌、霉菌）通常需要更丰富的培养基。

六、总结

营养琼脂是微生物实验室的“基础培养基”，凭借简单的成分和广泛的适用性，成为细菌培养、分离和计数的常用工具，尤其适合初学者或常规细菌学检测。但需注意，它不能满足所有微生物的生长需求，需根据目标菌的营养特性选择合适的培养基。

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