人巨细胞白血病细胞株培养过程中无菌操作的注意事项！

人巨细胞白血病细胞株多为悬浮/半贴壁型，操作中的无菌操作是防控污染的核心环节，需聚焦试剂处理、细胞操作、环境管控三大核心维度，具体注意事项如下：

一、试剂与耗材操作：杜绝源头污染

1、试剂开盖与取用

所有液体试剂（培养基、胎牛血清、PBS、细胞因子等）开盖前，必须用 75% 酒精彻底擦拭瓶身外壁、瓶口螺纹及瓶盖内侧，待酒精完全挥发后再开盖（未挥发的酒精接触培养基会产生细胞毒性，且可能破坏无菌环境）。

开盖时保持试剂瓶倾斜 45°（避免垂直开盖让空气中的微生物落入瓶内），瓶盖打开后内侧朝上放置在超净台无菌区域，严禁接触台面；取用后立即盖紧瓶盖，减少试剂暴露时间。

移液时使用一次性无菌吸头，吸头尖端仅伸入试剂液面下，避免接触瓶口内壁（瓶口是污染高发区）；严禁同一吸头吸取不同试剂/不同批次细胞悬液，防止交叉污染。

2、耗材使用规范

一次性移液管、离心管、培养瓶等，仅在超净台内开封取用，开封后未使用的耗材需密封放回无菌包装，不可暴露在超净台外。

如需使用玻璃移液管等非一次性耗材，需提前高压灭菌（121、15psi、20 分钟）并烘干，操作中用无菌镊子夹取，避免徒手接触耗材内壁/尖端。

二、细胞操作：减少暴露与损伤

1、细胞悬液处理

复苏、传代、换液时，培养瓶/离心管仅在超净台内开盖，操作全程保持瓶口朝向超净台内侧（避免正对操作人员呼吸方向）。

半贴壁的 Mo7e 细胞需吹打分散时，使用无菌移液管轻柔吹打（避免剧烈吹打产生气泡，气泡易携带空气中的微生物进入培养基），吹打后静置片刻再转移，减少细胞悬液与空气的接触。

离心收集细胞时，离心管需盖紧盖子后再移出超净台；离心完成后，先在超净台外用 75% 酒精擦拭离心管外壁，再移入超净台开盖处理，避免离心过程中粘附的污染物进入。

2、操作节奏与细节

全程动作连贯且轻柔，避免频繁开关超净台玻璃门（每次开门会破坏台内气流平衡，增加污染风险）；若需补充耗材，仅打开玻璃门 1/3 宽度，快速取放后立即关闭。

严禁在超净台内进行非无菌操作（如书写记录、整理非灭菌文件），手臂仅在超净台开口范围内活动，避免手臂跨越试剂/细胞培养瓶上方（防止手臂上的微生物掉落）。

三、环境与人员管控：阻断外源污染

1、人员行为规范

操作中全程佩戴无菌手套、口罩、帽子（头发和口鼻需完全遮盖），手套若接触超净台外物品（如手机、笔、实验台），需立即更换；更换手套后需用 75% 酒精擦拭外层，再继续操作。

禁止在操作过程中说话、咳嗽、打喷嚏，如需咳嗽需转身远离超净台，且更换手套；避免用手触摸口罩、面部后再接触耗材。

2、超净台内环境维护

超净台内仅放置本次操作必需物品，耗材摆放遵循“从左到右/从里到外”的操作动线，避免杂物遮挡高效过滤器出风口，确保无菌气流覆盖整个操作区域。

若操作中不慎将培养基/细胞悬液洒在超净台台面，需立即用 75% 酒精浸湿的无菌纱布擦拭，避免污染物扩散；洒出的含细胞液体需按生物安全规范处理，不可直接丢弃。

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