CAS检测培养基的核心原理和使用方法及注意事项!
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CAS 检测培养基基于铬天青 S(CAS)与铁离子的显色反应,用于筛选产铁载体的微生物,使用需遵循“制备培养基→接种→培养→观察显色圈”的核心流程。
一、核心原理
CAS 是一种显色剂,能与培养基中的 Fe³形成稳定的蓝色络合物(CAS-Fe³)。
产铁载体的微生物会分泌铁载体,铁载体对 Fe³的亲和力高于 CAS,会从络合物中夺取 Fe³。
失去 Fe³的 CAS 会恢复本身的橙黄色,在菌落周围形成橙黄色显色圈,显色圈大小可反映铁载体产生能力。
二、使用方法
培养基制备:按配方(含 CAS、FeCl、十六烷基三甲基溴化铵等)溶解各成分,调节 pH 至 7.0-7.2,121高压灭菌 20 分钟,冷却至 50左右倒平板。
接种操作:用无菌接种环挑取单菌落,在培养基平板上点接(每板可接 3-5 个菌落,间距均匀),或采用涂布法接种菌液。
培养条件:将平板倒置,置于微生物适宜温度(细菌 37、真菌 28)下培养 24-72 小时。
结果观察:培养后观察菌落周围是否出现橙黄色显色圈,有显色圈说明菌株产铁载体,圈径与菌落直径比值越大,产铁载体能力越强。
三、关键注意事项
培养基成分需准确称量,尤其是 CAS 和 Fe³的比例,直接影响显色效果。
灭菌后需快速倒平板,避免 CAS-Fe³络合物沉淀,平板需避光保存。
接种时保证无菌操作,防止杂菌污染干扰结果判断。
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