酚红肉汤培养基的使用前准备与操作步骤及注意事项！

 

酚红肉汤培养基是一种常用于细菌培养及糖发酵试验的培养基（通过观察酚红指示剂颜色变化判断细菌是否分解糖类产酸），其使用需遵循无菌操作原则，确保结果准确。以下是详细使用方法及相关说明：

 

一、培养基基础信息

 

核心成分：蛋白胨（提供氮源）、氯化钠（维持渗透压）、特定糖类（如葡萄糖、乳糖等，根据试验需求添加）、酚红（pH 指示剂，中性时呈橙红色，酸性时变黄，碱性时变红）。

 

作用：培养细菌并观察其对糖类的分解能力（产酸则变黄，若产酸同时产气，可观察到试管内有气泡）。

 

适用场景：细菌鉴定（如肠道杆菌的糖发酵试验）、微生物计数前的增菌培养等。

 

二、使用前准备

 

1、培养基检查

 

外观：未灭菌的培养基应为澄清液体，无沉淀、浑浊或杂菌污染（如霉斑）；灭菌后若有轻微沉淀，可加热溶解后摇匀。

 

储存：未使用的培养基需冷藏（2-8），避免冷冻或高温，使用前需平衡至室温（防止温差导致试管内壁凝结水珠影响观察）。

 

2、器具准备

 

无菌试管、接种环（或移液枪及无菌吸头）、酒精灯、试管架、记号笔等。

 

若需观察产气，可在培养基中预先放入“杜氏小管”（倒置的小玻璃管，灭菌前确保管内无气泡）。

 

三、具体使用步骤

 

步骤 1：培养基灭菌（针对未灭菌的自制或散装培养基）

 

若为市售“即用型灭菌培养基”，可直接使用；若为自制或未灭菌产品，需高压蒸汽灭菌：

 

灭菌条件：121、103.4kPa（15psi），灭菌 15-20 分钟（注意：糖类易因高温分解，灭菌时间不宜过长）。

 

灭菌后处理：取出后趁热摇匀（避免成分沉淀），若需加杜氏小管，可在此时无菌操作放入，直立放置冷却至室温。

 

步骤 2：接种样品

 

标记试管：用记号笔标注样品名称、接种日期、培养基类型（如“葡萄糖酚红肉汤”）。

 

无菌操作接种：

 

固体样品（如菌落）：用灼烧灭菌并冷却的接种环挑取单个菌落，伸入培养基中轻轻研磨并混匀。

 

液体样品（如菌悬液）：用无菌移液枪吸取 0.1-0.5mL 样品，注入培养基中，轻轻摇匀。

 

空白对照：设置 1 支未接种的培养基作为对照（排除培养基自身变化干扰）。

 

步骤 3：培养观察

 

培养条件：根据目标菌需求设置温度（如肠道菌 37）和时间（通常 18-24 小时，部分菌需延长至 48 小时），需有氧培养时直立放置即可。

 

结果观察：

 

产酸判断：培养基颜色从橙红色变为黄色（因细菌分解糖类产生有机酸，pH 下降）。

 

产气判断：若有杜氏小管，管内出现气泡（即使仅 1 小气泡，也视为产气）。

 

对照要求：空白对照应保持橙红色，无颜色变化或浑浊（否则培养基污染，结果无效）。

 

步骤 4：后续处理

 

若需进一步鉴定，可从阳性培养基中挑取菌液转接至其他培养基。

 

废弃培养基需高压灭菌后再处理（避免微生物污染环境）。

 

四、注意事项

 

无菌操作：全程在酒精灯火焰旁进行，接种环、移液枪头等需彻底灭菌，避免杂菌污染导致假阳性。

 

颜色判断：培养时间不足可能导致颜色变化不明显，过长可能因细菌分解蛋白胨产碱（颜色变红），需严格控制时间。

 

培养基保存：灭菌后的培养基若未使用，需冷藏且在 1 周内使用（避免水分蒸发或成分变质）；反复冻融会破坏营养成分，不建议冷冻保存。

 

特殊情况：若培养基接种后浑浊但颜色未变，可能是细菌不分解该糖类但能利用其他营养生长，需结合其他试验判断。

 

通过以上步骤，可规范使用酚红肉汤培养基完成细菌培养及糖发酵试验。若用于特定菌种鉴定，需结合菌种特性调整培养条件（如温度、糖类类型），确保结果可靠。

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