霉菌计数准确性的控制方法与操作步骤及注意事项！

 

百欧博伟生物：保证霉菌计数结果的准确性需要从样品处理、实验操作、培养条件到数据分析等多个环节进行严格控制。以下是关键步骤和注意事项：

 

一、样品采集与处理

 

1、代表性取样：确保样品混合均匀（液体样品摇匀，固体样品均质化），避免局部微生物分布不均。

 

2、及时检测：尽快处理样品，防止霉菌繁殖或死亡导致数量变化。

 

3、保存条件：如需延迟检测，按规定冷藏（通常2~8）或冷冻保存，避免反复冻融。

 

二、稀释与接种

 

1、梯度稀释：

 

使用无菌生理盐水或缓冲液进行系列稀释（如10倍梯度）。

 

更换移液管或枪头，避免交叉污染。

 

2、选择合适稀释度：确保最终平板的菌落数在30~300之间（如菌落过多可导致重叠，过少则统计误差大）。

 

3、接种方法：

 

倾注法：将样品与熔化的培养基混合，适用于耐热霉菌。

 

涂布法：将样品涂布于已凝固的培养基表面，适用于对温度敏感的霉菌。

 

三、培养基与培养条件

 

1、培养基选择：

 

使用选择性培养基（如孟加拉红培养基）抑制细菌生长，促进霉菌繁殖。

 

添加抗生素（如氯霉素）或抑菌剂（如玫瑰红钠）抑制细菌。

 

2、培养条件：

 

温度：通常25~28，根据目标霉菌调整。

 

时间：一般5~7天，某些霉菌可能需要更长时间。

 

湿度：保持一定湿度防止培养基干燥。

 

避光培养：部分培养基（如含玫瑰红钠）需避光。

 

四、菌落识别与计数

 

1、区分霉菌与其他微生物：

 

霉菌菌落通常呈绒毛状、絮状或蜘蛛网状，颜色多样（白、绿、黑等）。

 

注意与酵母菌、放线菌区分（形态学或镜检确认）。

 

2、处理扩散菌落：

 

若霉菌蔓延覆盖平板，可记录为“蔓延菌落”并估算，或使用低营养培养基限制扩散。

 

3、多菌落合并计数：

 

距离较近的小菌落可能为同一菌体繁殖，按1个计数；明显独立的菌落分开计数。

 

五、质量控制

 

1、空白对照：每批次实验设置无菌水或缓冲液对照，确保无污染。

 

2、阳性对照：使用已知浓度的霉菌孢子悬液验证培养基和培养条件的有效性。

 

3、重复实验：每个稀释度至少做2~3个平行样，取平均值。

 

4、人员培训：统一计数标准，减少主观误差。

 

六、数据记录与结果分析

 

1、详细记录：包括稀释倍数、菌落形态、培养时间等。

 

2、计算公式：霉菌数（CFU/g或CFU/mL）=平均菌落数×稀释倍数

 

3、不确定度评估：根据平行实验数据计算标准偏差，确保结果可信度。

 

七、特殊情况的处理

 

1、高背景干扰：若样品中细菌过多，可增加选择性培养基或预处理（如过滤）。

 

2、孢子与菌丝体的区分：某些方法可能仅计数孢子，需结合镜检确认菌丝体是否被计入。

 

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