真菌检测质量控制的关键要点及检测方法选择与验证！

 

 

百欧博伟生物：真菌检测的质量控制是确保检测结果准确性和可靠性的关键环节，涉及从样本采集到报告解读的全程管理。以下是质量控制的关键要点：

 

一、样本采集与运输

 

1、标准化操作：制定明确的采集指南（如采集部位、时间、方法），例如血液培养应在发热高峰期采集，呼吸道样本避免口腔污染。

 

2、运输条件：控制温度（如4冷藏或常温）、时间（尽快送检），使用专用运输介质（如无菌容器、抗凝剂）。

 

3、样本标识：确保样本信息完整（患者信息、采集时间、部位），避免混淆。

 

二、实验室前处理

 

1、样本验收：检查样本量、完整性（如无泄漏）、符合检测要求（如痰样本需合格，避免唾液污染）。

 

2、保存与预处理：根据样本类型选择保存条件（如冷冻、冷藏），均质化处理（如痰液液化）以提高检出率。

 

三、检测方法选择与验证

 

1、方法选择：

 

传统培养法：金标准，但耗时长（2-4周），需选择合适培养基（如沙氏培养基、显色培养基）。

 

分子检测（PCR、NGS）：快速灵敏，但需防污染，验证引物特异性。

 

抗原/抗体检测（如G试验、GM试验）：注意交叉反应（如β-葡聚糖可能受细菌污染干扰）。

 

质谱技术（MALDI-TOF）：依赖数据库完整性，需定期更新。

 

2、方法验证：新方法需验证灵敏度、特异性、重复性，与现有方法对比。

 

四、检测过程质量控制

 

1、对照设置：

 

阳性对照：已知菌株（如白色念珠菌ATCC标准株）验证试剂有效性。

 

阴性对照：无菌培养基或生理盐水排除污染。

 

内参基因（分子检测）：监控提取效率（如人类β-肌动蛋白）。

 

2、重复检测：临界值结果（如PCR的Ct值在阈值附近）或异常值需复检。

 

3、仪器校准：定期校准培养箱、PCR仪、质谱仪，记录维护日志。

 

五、结果判读与报告

 

1、标准化判读：

 

培养法：菌落形态（颜色、质地）、显微镜特征（孢子、菌丝）。

 

分子检测：阈值设定（如Ct值≤35为阳性），排除引物二聚体干扰。

 

质谱：置信度评分（如≥2.0为可信）。

 

2、交叉验证：培养阴性但抗原阳性时，结合临床判断（如曲霉菌GM试验与影像学）。

 

3、报告内容：明确菌种名称（如烟曲霉而非“曲霉属”）、药敏结果（CLSI或EUCAST标准）、备注局限性（如痰中念珠菌可能为定植）。

 

六、质量评估与改进

 

1、室内质控（IQC）：每日/每批次检测使用质控品（如已知阳性样本）。

 

2、室间质评（EQA）：参加CAP、CLSI等机构的外部质评，分析偏差。

 

3、错误分析：记录假阳性/阴性原因（如污染、提取失败），改进流程。

 

4、人员培训：定期考核形态学识别、分子技术操作，更新知识（如新发真菌耐药机制）。

 

七、生物安全与法规合规

 

1、生物安全：高致病性真菌（如组织胞浆菌）需在BSL-3实验室操作。

 

2、合规性：遵循CLSI M38/M59/M61（药敏）、ISO 15189（质量管理）标准。

 

八、特殊场景处理

 

1、抗真菌药物影响：用药后血培养阳性率下降，优先采用分子检测或抗原检测。

 

2、免疫抑制患者：低菌量样本需富集（如脑脊液离心）或使用高灵敏度方法（如PCR）。

 

3、混合感染：联合培养、分子检测（多重PCR）和宏基因组测序（mNGS）提高检出率。

 

九、总结

 

真菌检测的质量控制需贯穿全流程，结合技术标准化、人员能力、仪器维护和临床沟通，最终目标是提供精准结果以指导抗真菌治疗，减少误诊和耐药风险。

 

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