原代细胞培养过程中，如何判断细胞是否被污染？

百欧博伟生物：原代细胞培养中判断污染的核心是通过形态观察、培养基变化、辅助检测综合判断，常见污染类型为细菌、真菌、支原体，具体方法如下：

一、肉眼观察（快速初步判断）

培养基浑浊度：正常培养基清澈透明，若出现浑浊（轻度雾状至严重乳白），多为细菌污染（细菌大量增殖导致）。

颜色变化：正常培养基因 pH 稳定呈浅红色/粉红色，污染后微生物代谢产生酸性物质，会快速变为黄色（细菌污染）或紫色（少数真菌污染）。

沉淀/漂浮物：培养基中出现白色、黄色小点沉淀（细菌聚集），或白色、绿色丝状/絮状漂浮物（真菌菌落），可直接判定污染。

二、显微镜观察（精准确认，推荐 100-200 倍镜）

细菌污染：视野中可见大量微小杆状、球状颗粒，快速运动（活菌），分布在细胞间隙或培养基中，细胞会逐渐变圆、脱落。

真菌污染：可见丝状菌丝、圆形孢子，或棉絮状菌落，菌丝会缠绕细胞，导致细胞形态异常、增殖停滞。

支原体污染：支原体体积小（0.1-0.3μm），普通光学显微镜难直接观察，需结合细胞状态或专项检测。

细胞状态关联：污染后细胞会出现贴壁差、变圆、皱缩、脱落，或增殖明显减慢，甚至完全停止生长。

三、专项检测（针对隐性污染，如支原体）

支原体检测试剂盒：常用 PCR 法、荧光染色法，可快速检测培养基或细胞裂解液中的支原体核酸/抗原，灵敏度高。

革兰氏染色：取少量培养基涂片染色，显微镜下观察细菌革兰氏阳性（紫色）或阴性（红色），明确污染类型。

无菌培养验证：取可疑培养基接种到普通肉汤培养基，37培养 24-48 小时，若浑浊则确认污染。

四、关键注意事项

观察需及时，每天换液或传代前常规检查，避免污染扩散。

区分“污染”与“细胞碎片”：细胞碎片无运动性，且不会导致培养基浑浊或颜色快速变化。

支原体污染隐蔽，若细胞长期增殖缓慢、形态异常，即使培养基无明显变化，也建议做专项检测。

北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！