大鼠毛囊角质细胞的培养条件与方法及具体操作步骤！

大鼠毛囊角质细胞是一种来源于大鼠正常皮肤组织的细胞，在毛囊的生长和发育过程中起着关键作用。以下是具体介绍：

一、细胞特性

组织来源：正常皮肤组织。

细胞形态：呈铺路石状或不规则形。

生长特性：贴壁生长。

细胞鉴定：广谱角蛋白（PCK）免疫荧光染色为阳性，细胞纯度可达 90% 以上。

微生物检测：不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

二、培养条件

培养基：通常使用基础培养基添加生长添加剂和双抗的完全培养基，具体配方因厂家而异。

培养环境：气相为 95% 空气和 5% 二氧化碳，温度为 37，培养箱湿度为 70%-80%。

传代比例：一般为 1:2 传代，倍增时间约为每周 2 至 3 次，每 2-3 天换液一次。

冻存条件：冻存液可选用 90% FBS、10% DMSO，或使用非程序冻存液。

主要功能：毛囊角质细胞作为一种特殊类型的角质形成细胞，受毛乳头细胞分泌的细胞因子或信号因子等作用，会迅速发生分化增殖或凋亡，进而诱导毛囊进入生长期或退行期，维持毛囊始终处于生长期、退行期和休止期的周期性循环。

应用领域：主要用于科研领域，如角质细胞特异性基因敲除导致小鼠毛囊干细胞动员加快的研究等，有助于深入了解毛囊生长发育的机制以及相关皮肤疾病的发病原理。

三、大鼠毛囊角质细胞的培养方法

大鼠毛囊角质细胞的核心培养方法有原代培养和传代培养两类，具体操作如下：

1、原代培养（从组织获取细胞）

取材消毒：选取健康大鼠背部皮肤，用 75% 乙醇消毒后，剥离皮下脂肪和结缔组织，剪成小块。

毛囊分离：用胰酶或胶原酶消化皮肤组织，温和振荡后过滤，分离出完整毛囊。

细胞接种：将毛囊接种到铺有胶原蛋白包被的培养皿中，加入角质细胞专用完全培养基。

初始培养：置于 37、5% CO培养箱，静置 24-48 小时，毛囊会迁出角质细胞并贴壁生长。

2、传代培养（维持细胞增殖）

换液时机：原代细胞生长至培养皿 80%-90% 汇合时，弃去旧培养基，用 PBS 清洗 2 次。

消化解离：加入适量胰酶，37孵育 2-5 分钟，镜下观察到细胞变圆后，加入含血清的培养基终止消化。

离心重悬：1000-1500rpm 离心 5 分钟，弃上清，用新鲜完全培养基重悬细胞沉淀。

接种传代：按 1:2 或 1:3 的比例接种到新的包被培养皿中，继续培养并定期换液。

3、关键辅助技术

纯化方法：若存在杂细胞，可通过差速贴壁（利用角质细胞贴壁速度差异）或免疫磁珠分选去除。

冻存与复苏：细胞增殖稳定后可冻存，复苏时 37水浴快速解冻，离心后重悬接种，恢复培养。

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