改良马丁琼脂培养基的制备方法与操作流程及质量控制！

 

改良马丁琼脂培养基的制备需严格遵循配方比例、pH 调节、灭菌等步骤，以保证培养基的无菌性和适用性（主要用于真菌培养）。以下是详细的制备流程：

 

一、制备前准备

 

1、试剂与材料

 

配方成分（按 1000mL 培养基计）：

 

葡萄糖 20.0g

 

蛋白胨 5.0g

 

酵母浸出粉 2.0g

 

琼脂 15.0g

 

纯化水 1000mL

 

仪器：电子天平、烧杯、玻璃棒、pH 计（或精密 pH 试纸）、高压蒸汽灭菌锅、锥形瓶（或试剂瓶）、漏斗、灭菌培养皿等。

 

辅助工具：纱布、棉塞（或硅胶塞）、牛皮纸（或铝箔）。

 

2、环境要求

 

称量和配制操作在洁净工作台或无菌室进行，避免杂菌污染。

 

所有玻璃器皿需提前清洗干净并干燥。

 

二、具体制备步骤

 

1、称量与溶解

 

按配方准确称取葡萄糖、蛋白胨、酵母浸出粉、琼脂，依次加入盛有适量纯化水（约 800mL）的烧杯中。

 

用玻璃棒搅拌均匀，置于石棉网或电热板上加热至沸腾，使所有成分（尤其是琼脂）完全溶解（加热时需不断搅拌，防止琼脂黏附烧杯底部导致焦糊）。

 

待溶液冷却至 50左右，加纯化水补足至 1000mL（因加热过程中水分会蒸发，需补至原定体积）。

 

2、pH 调节

 

用 pH 计（或精密 pH 试纸）测定溶液 pH，用 1mol/L 盐酸或 1mol/L 氢氧化钠溶液调节 pH 至 4.0~6.0（偏酸性环境，抑制细菌生长，适合真菌）。

 

调节后再次搅拌均匀，确认 pH 符合要求。

 

3、分装与灭菌

 

将配制好的培养基趁热分装至锥形瓶中（避免琼脂凝固），每瓶体积不超过容器容积的 2/3，瓶口塞紧棉塞，外包牛皮纸（或铝箔），标记名称、配制日期。

 

采用高压蒸汽灭菌：121、103.4kPa（15 磅）灭菌 20 分钟（灭菌时间过长可能破坏营养成分，过短则无法保证无菌）。

 

4、灭菌后处理

 

灭菌结束后，待灭菌锅压力降至 0、温度降至 80以下时，取出锥形瓶，轻轻摇匀（使琼脂分布均匀），避免剧烈晃动导致气泡产生。

 

若需立即倒平板：待培养基冷却至 50~60（手感微烫但不烫手）时，在洁净工作台中倒入灭菌培养皿（每皿约 15~20mL），盖好皿盖，水平放置待凝固（约 30~60 分钟）。

 

若暂不使用：将灭菌后的培养基（未倒平板）在 4~20避光保存，避免冻结，使用前需重新加热融化（可水浴加热），待冷却至 50~60后倒平板。

 

三、质量控制

 

1、无菌检查：取少量培养基（或倒好的平板）在 23~28培养 5~7 天，若无菌落生长，说明灭菌合格。

 

2、适用性检查：接种已知的真菌（如白色念珠菌、黑曲霉），在 23~28培养，观察是否生长良好（菌落形态典型），同时接种细菌（如金黄色葡萄球菌），观察是否被抑制（不生长或生长微弱），以确认培养基的选择性和有效性。

 

通过以上步骤，可制备出符合要求的改良马丁琼脂培养基，用于真菌的分离、培养和计数。

 

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