小鼠肾小管平滑肌细胞的培养方法与功能及应用领域！

 

小鼠肾小管平滑肌细胞（Mouse Renal Tubular Smooth Muscle Cells）是一种与肾脏功能密切相关的原代细胞。以下是关于它的详细介绍：

 

一、组织来源

 

小鼠肾小管平滑肌细胞分离自小鼠的肾组织，肾小管是与肾小囊壁层相连的细长上皮性小管，包括近曲小管、髓袢和远曲小管等部分。

 

二、细胞形态

 

原代分离培养 3 天后，可见细胞贴壁伸展，形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中。2 周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。

 

三、生长特性

 

属于贴壁生长的细胞，在培养时需要附着在培养器皿表面才能生长增殖，通常在 37°C、5% CO的环境中培养。

 

四、分子特征

 

高度表达α- 平滑肌肌动蛋白、钙调蛋白等平滑肌特异性标志物，这些标志物可用于细胞的鉴定。

 

五、主要功能

 

参与肾小管的收缩与舒张，进而调节肾脏的血流与尿液排泄，在维持机体体液平衡及酸碱平衡等方面发挥着重要作用。

 

六、应用领域

 

广泛应用于肾脏生理学研究、血管生物学研究、肾脏疾病模型构建、药物筛选与毒性研究以及信号通路研究等领域，为肾脏疾病治疗和药物研发提供了有力支持。

 

七、培养与保存

 

一般使用专用完全培养基进行培养，换液频率为每 2-3 天一次。冻存条件为 90% FBS（胎牛血清）+10% DMSO（二甲基亚砜）。

 

八、小鼠肾小管平滑肌细胞的培养方法

 

这个问题很关键，精准指向了细胞实验的核心操作环节。小鼠肾小管平滑肌细胞的培养主要遵循原代分离培养和传代培养两大流程，核心是严格控制无菌环境与模拟体内生长条件。

 

（一）原代培养（从组织到单细胞）

 

原代培养是获取目标细胞的第一步，关键在于无菌操作和高效分离。

 

1、实验材料准备

 

动物：选择健康的 SPF 级小鼠，通常为 4-6 周龄。

 

试剂：PBS 缓冲液（含双抗）、0.25% 胰蛋白酶 - EDTA 消化液、肾小管平滑肌细胞专用完全培养基、75% 酒精。

 

器械：无菌手术剪、镊子、培养皿、离心管、移液器。

 

2、组织获取与处理

 

小鼠经颈椎脱臼处死后，用 75% 酒精浸泡消毒 5 分钟。

 

在无菌超净台内，剪开腹腔取出双侧肾脏，放入含双抗的 PBS 中清洗 3 次，去除表面血液和脂肪。

 

用手术剪将肾脏剪成 1mm³ 左右的小块，再次用 PBS 清洗至液体澄清。

 

3、细胞消化与分离

 

弃去 PBS，加入适量 0.25% 胰蛋白酶 - EDTA 消化液，37°C 恒温培养箱中消化 15-20 分钟，期间每隔 5 分钟轻轻摇晃一次。

 

当组织块边缘出现模糊时，加入等量完全培养基终止消化，用移液器轻轻吹打 10-15 次，使细胞分散。

 

用 200 目细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片，收集滤液至离心管。

 

4、细胞接种与培养

 

1000rpm 离心 5 分钟，弃去上清液，加入完全培养基重悬细胞，调整细胞密度至 1×10-1×10个 /mL。

 

将细胞悬液接种到培养皿中，放入 37°C、5% CO的恒温培养箱中培养，24 小时后首次更换培养基，去除未贴壁细胞。

 

（二）传代培养（维持细胞增殖）

 

当原代细胞生长至培养皿底面积的 80%-90% 时，需进行传代以避免细胞过度密集。

 

1、传代前准备

 

提前将完全培养基、PBS、胰蛋白酶 - EDTA 消化液置于 37°C 水浴锅中预热。

 

用 75% 酒精擦拭超净台台面和培养皿表面，确保无菌环境。

 

2、细胞消化与收集

 

弃去培养皿中的旧培养基，用 PBS 轻轻冲洗细胞表面 2 次，去除残留培养基。

 

加入适量胰蛋白酶 - EDTA 消化液，覆盖细胞表面即可，37°C 培养箱中孵育 2-3 分钟，显微镜下观察到细胞间隙增大、形态变圆时，终止消化。

 

加入完全培养基，用移液器轻轻吹打细胞，使其从培养皿表面脱落，形成单细胞悬液，收集至离心管。

 

3、细胞接种与培养

 

1000rpm 离心 5 分钟，弃去上清液，用新鲜完全培养基重悬细胞。

 

按照 1:2 或 1:3 的比例将细胞接种到新的培养皿中，补充完全培养基至合适体积，放回培养箱培养，2-3 天后更换培养基。

 

九、关键注意事项

 

无菌控制：全程在超净台内操作，器械和试剂需提前灭菌，避免细菌、真菌污染；操作人员需佩戴无菌手套、口罩，酒精消毒双手。

 

消化时间：消化不足会导致细胞难以脱落，消化过度会损伤细胞活性，需根据显微镜观察结果灵活调整。

 

培养基选择：必须使用肾小管平滑肌细胞专用完全培养基，不可用通用培养基替代，以保证细胞的生长特性和功能稳定。

 

细胞鉴定：培养成功后，需通过免疫荧光染色检测等特异性标志物，确认细胞纯度，避免杂细胞污染。

 

北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！