阔盘吸虫通用PCR试剂盒的特点与培养步骤及应用！

一、背景

阔盘吸虫通用PCR试剂盒是一种用于检测阔盘吸虫的PCR试剂盒。阔盘吸虫是一种寄生虫，可以感染人类和动物，引起阔盘吸虫病。这种疾病主要通过食用被感染的水生植物或饮用被感染的水来传播。

PCR是一种常用的分子生物学技术，可以扩增DNA片段并进行检测。阔盘吸虫通用PCR试剂盒利用PCR技术检测阔盘吸虫的DNA，从而确定是否感染了阔盘吸虫。

使用阔盘吸虫通用PCR试剂盒时，需要提取样本中的DNA，并将其加入到PCR反应体系中。在PCR反应过程中，如果存在阔盘吸虫的DNA，它将被扩增并形成可见的DNA片段。通过检测这些片段的存在与否，可以确定是否感染了阔盘吸虫。

阔盘吸虫通用PCR试剂盒是一种快速、准确、可靠的检测方法，可以帮助医生和研究人员诊断和监测阔盘吸虫病的流行情况。

二、阔盘吸虫通用PCR试剂盒是一种用于检测阔盘吸虫的生物试剂，具有以下特点：

即开即用：用户只需要提供DNA模板，无需进行预处理。

引物优化：引物经过精心优化，具有专一性强、扩增效率高等特点，只扩增阔盘吸虫通用，与其他病原没有交叉反应。

阳性对照：提供阳性对照，便于区分假阴性样品，提高检测准确性。

上样染料：PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳，方便快捷。

高性价比：本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。

三、阔盘吸虫通用PCR试剂盒的使用方法一般包括以下步骤

1、准备样品：收集待检测的食品或其他材料，并按照试剂盒的要求进行制备。

2、提取DNA：使用试剂盒附带的核酸提取试剂盒，按照说明书提取样品的DNA。

3、配置PCR反应液：按照试剂盒说明书的要求，配置PCR反应液。

4、进行PCR反应：将提取的DNA加入PCR反应液中，按照试剂盒说明书设置PCR反应条件和程序。

5、分析结果：PCR反应结束后，可以通过电泳、荧光检测等方法对结果进行分析。

四、应用

阔盘吸虫通用PCR试剂盒可以用于我国片形吸虫核糖体DNA及线粒体DNA多态性的研究：

根据Huang等发表的片形吸虫核糖体DNA(rDNA)的第二内转录间隔区(ITS-2)序列，设计两对特异性引物，使用阔盘吸虫通用PCR试剂盒，建立特异PCR方法来鉴别片形吸虫的种类，并评价此方法的特异性和敏感性。

结果：76株片形吸虫经特异PCR鉴定被分为三“类”，即肝片吸虫、大片吸虫和两个虫种的“中间型”，而且三“类”代表性样品ITS-2部分片段的测序结果也证实了上述结论；此阔盘吸虫通用PCR试剂盒方法与寄生于牛或羊的其它虫体如前后盘吸虫、胰阔盘吸虫、日本分体吸虫、牛弓首蛔虫无交叉反应性；能检测到的大片吸虫最低DNA量是350pg，能检测到的肝片吸虫最低DNA量是110pg。

选择经阔盘吸虫通用PCR试剂盒特异PCR方法鉴定的三“类”片形吸虫的代表性样品36株，参照基因库已发表的肝片吸虫第一内转录间隔区(ITS-1)序列设计一对保守引物，首先扩增出ITS-1部分序列，再经单链构象多态性(SSCP)分析方法进行分析，结果SSCP显示三种带型，第一种为大片吸虫的带型，第二种为肝片吸虫带型，第三种为两种带形的混合带型。

对代表性样品的ITS-1进行测序，结果ITS-1全长为422bp，共有5个变异位点；根据ITS-1序广西大学硕十论文我国片形吸虫核糖体DNA及线粒体DNA多态性的研究列变异位点可区分出两种片形吸虫;表现为混合带型的样品在变异位点具有肝片吸虫和大片吸虫的碱基重叠现象。此结果和阔盘吸虫通用PCR试剂盒特异pCR方法鉴定的结果相互支持，表明!Ts一1片段亦可作为遗传标记来研究片形吸虫的多态性。

在研究核糖体DNA的基础上，对76株片形吸虫线粒体基因组细胞色素氧化酶亚基1基因部分序列(pcoxl)和线粒体NAOH脱氢酶亚单位1基因部分序列(pnadl)进行PCR扩增及DNA单链构象多态性(SSCP)分析。

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