甘油生化管在非发酵革兰阴性杆菌检测中的具体应用！

 

非发酵革兰阴性杆菌（如假单胞菌属、不动杆菌属、伯克霍尔德菌属等）是医院感染的重要致病菌，其核心特征是不发酵葡萄糖，但对其他碳源（如甘油）的利用能力存在显著差异。甘油生化管通过检测这类细菌对甘油的发酵（或氧化）能力，成为辅助鉴别和鉴定的关键工具。以下是其具体应用：

 

一、核心原理（针对非发酵菌）

 

非发酵菌多数不能通过发酵途径分解葡萄糖，但部分菌株可通过氧化或发酵方式利用甘油产生酸，导致培养基 pH 下降，pH 指示剂（如溴甲酚紫）变色。甘油生化管通过观察颜色变化（及是否产气），区分不同非发酵菌的代谢特性：

 

阳性反应：细菌能利用甘油产酸，培养基由紫变黄；

 

阴性反应：不能利用甘油，培养基保持紫色不变。

 

二、主要非发酵菌的鉴别应用

 

1、假单胞菌属的区分

 

假单胞菌属是临床最常见的非发酵菌，不同种对甘油的利用差异明显：

 

铜绿假单胞菌：绝大多数菌株不能利用甘油（甘油阴性），结合其“氧化酶阳性、产绿脓素、有特殊生姜气味”等特征，可快速初步鉴定（临床中铜绿假单胞菌占假单胞菌感染的 70% 以上，此指标可缩小鉴定范围）。

 

荧光假单胞菌：多数能缓慢发酵甘油（阳性），且在紫外线下产生荧光素，可与铜绿假单胞菌（甘油阴性 + 无荧光）区分。

 

恶臭假单胞菌：甘油阴性，且氧化酶阳性、不产色素，结合其“有恶臭气味”的特点，可与其他假单胞菌鉴别。

 

2、伯克霍尔德菌属的鉴定

 

洋葱伯克霍尔德菌：能发酵甘油产酸（阳性），且氧化酶试验阳性、能还原硝酸盐，这一特性可与其他非发酵菌（如不动杆菌）区分。该菌对多种抗生素耐药，常引起囊性纤维化患者或免疫低下者感染，准确鉴定对治疗至关重要。

 

类鼻疽伯克霍尔德菌：可缓慢发酵甘油产酸，结合其“在血平板上呈黏液型菌落、氧化酶阳性”等特征，有助于与假单胞菌区分（类鼻疽伯克霍尔德菌是类鼻疽病的病原菌，需高度警惕）。

 

3、不动杆菌属与其他菌属的鉴别

 

不动杆菌属：多数菌株不能利用甘油（甘油阴性），且氧化酶试验阴性、动力阴性，这一组合特征可与“甘油阳性 + 氧化酶阳性”的伯克霍尔德菌属、部分假单胞菌属区分。

 

例如：鲍曼不动杆菌（临床最常见不动杆菌）表现为“甘油阴性 + 氧化酶阴性 + 葡萄糖氧化阳性”，而洋葱伯克霍尔德菌为“甘油阳性 + 氧化酶阳性 + 葡萄糖氧化阳性”，两者通过甘油试验可快速区分。

 

4、其他非发酵菌的辅助鉴别

 

窄食单胞菌属（如嗜麦芽窄食单胞菌）：多数不发酵甘油（阴性），但可通过其他特性进一步确认，甘油试验可排除部分甘油阳性菌。

 

产碱杆菌属：通常不能利用甘油（阴性），且氧化酶阳性、动力阳性，结合甘油试验可与能利用甘油的菌株区分。

 

三、检测操作要点（针对非发酵菌）

 

接种前纯化：非发酵菌常从临床标本（如痰、血液、尿液）中分离，需先通过血平板或麦康凯平板获得纯培养单菌落（避免杂菌干扰，尤其是混有发酵菌时）。

 

接种方法：用无菌接种环挑取新鲜单菌落（培养 24-48 小时），穿刺或混匀于甘油生化管中（若含杜氏小管，需确保初始无气泡）。

 

培养条件：

 

温度：35-37（部分菌株需 28，如类鼻疽伯克霍尔德菌）；

 

时间：多数 24-48 小时可观察结果，慢反应菌株（如伯克霍尔德菌）需延长至 5-7 天，避免漏判。

 

结果判断：

 

阳性：培养基由紫变黄（产酸）；

 

阴性：颜色不变（仍为紫色）；

 

注意：非发酵菌产气能力极弱，杜氏小管中气泡罕见，主要以颜色变化为判断核心。

 

四、与其他试验的联合应用

 

非发酵菌的鉴定需结合多项指标，甘油试验需与以下试验联合判断，提高准确性：

 

菌属/种     甘油发酵试验    氧化酶   葡萄糖氧化   其他关键特征

 

铜绿假单胞菌 阴性   阳性  阳性   产绿脓素、有生姜味

 

洋葱伯克霍尔德菌 阳性 阳性 阳性 黏液型菌落、还原硝酸盐

 

鲍曼不动杆菌  阴性 阴性 阳性 无动力、对多种抗生素耐药

 

嗜麦芽窄食单胞菌 阴性 阴性 氧化葡萄糖 对亚胺培南耐药、麦芽糖阳性

 

五、临床意义

 

非发酵菌常引起免疫低下患者的严重感染（肺炎、败血症等），且耐药性强（如多重耐药鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌）。甘油生化管通过快速区分其代谢特性，可缩短鉴定时间，为早期选择敏感抗生素（如伯克霍尔德菌对复方新诺明敏感，而鲍曼不动杆菌可能需多粘菌素）提供重要依据，降低感染死亡率。

 

综上，甘油生化管在非发酵革兰阴性杆菌的检测中，通过精准反映碳源利用差异，成为细菌分类鉴定的“阶梯式”工具，与其他生化试验联合，为临床病原菌的快速识别和治疗指导提供了关键支持。

 

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